ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Материалы исследования
Характеристика фармакологических препаратов и физиологически активных веществ
В работе использовали производные пиридинкарбоновых кислот, синтезированные в
Институте фармакологии и токсикологии АМН Украины, строение которых было
подтверждено спектральными методами, а чистота —хроматографическим анализом.
У многих из них выявлены анальгезирующие и противовоспалительные свойства / 22,
24, 25/. По своей химической природе (рис.2.1, табл.2.1) данные ФАВ являются
производными пиридинкарбоновых кислот, а именно:
а) четвертичная соль никотиновой кислоты — вещество ПВ?2, представляет собой
желтый порошок, умеренно растворимый в воде, лучше в спирте и хлороформе /22/;
б) хлоргидраты амидов никотиновой и изоникотиновой кислот —вещества ПВ?3, ПВ?5,
и ПВ?6 – это белые кристаллические вещества, хорошо растворимы и в воде, и в
спирте /24, 25/;
в) хлоргидраты метилового эфира изоникотиновой и никотиновой кислот - вещества
ПВ-4 и ПВ-7 - белые кристаллические вещества, хорошо растворимые и в воде, и в
спирте /22, 24/.
Новый отечественный ненаркотический анальгетик, обладающий
противовоспалительной, жаропонижающей и интерфероногенной активностью /23, 24,
79, 129/ - препарат Амизон (4?[N?бензил]-аминокарбонил?1?метилпиридиний йодид),
разработанный в Институте
ПИРИДИН
а)
ИЗОНИКОТИНОВАЯ НИКОТИНОВАЯ
(ПИРИДИН-3-КАРБОНОВАЯ) (ПИРИДИН-4-КАРБОНОВАЯ)
КИСЛОТА КИСЛОТА
б)
ЭМОКСИПИН
Рис.2.1. Гетероцикл с одним гетероатомом азота – пиридин и его производные: а)
пиридинкарбоновые кислоты; б) препарат Эмоксипин.
Таблица 2.1
Производные пиридинкарбоновых кислот - никотиновой (пиридин-3-карбоновой) и
изоникотиновой (пиридин-4-карбоновой).
п/п
Шифр
вещества
Формула вещества
Название вещества
Брутто
Структурная формула
3
5
1.
ПВ-2
C14H15N2OI
3-[N-бензил]
аминокарбонил– 1 –метилпиридиний йодид
2.
ПВ-3
C13H13N2OCl
Хлоргидрат
N-бензиламида изоникотиновой кислоты
3.
ПВ-4
C14H12NO4Cl
Хлоргидрат мети-лового эфира О-изоникотиноил-салициловой кислоты
4.
ПВ-5
C17H22N3O2Cl
Хлоргидрат
1-адамантоил-2-изоникотиноил гидразина
5.
ПВ-6
C13H13N2O2Cl
Хлоргидрат 2-[ме-токсифенил] амида изоникотиновой кислоты
6.
ПВ-7
C14H12NO4Cl
Хлоргидрат метилового эфира О- никотиноил-салициловой кислоты
7.
Амизон
C14H15N2OI
4-[N-бензил] ами-нокарбонил – 1 – метилпиридиний йодид
фармакологии и токсикологии АМН Украины. Этот препарат, который по своей
химической природе также является производным пиридинкарбоновой
(изоникотиновой) кислоты, был успешно применен для лечения вирусного гепатита
А, клиническая картина которого близка к таковой при химическом поражении
печени / 109, 130/.
Используемые в работе производные пиридинкарбоновых кислот относятся к числу
соединений с умеренной токсичностью: ЛД50 при внутрибрюшинном введении
колеблется от 300 до1500 мг/кг.
Кроме того, в работе использовали АСК ( 2?ацетоксибензойная кислота;
салициловый эфир уксусной кислоты) производства фирмы "Serva", Германия; и
антиоксидант Эмоксипин, который относится к 1,4-дигидропиридиновому ряду
(3?окси?6метил?2-этил-пиридин?3?ола гидрохлорид), производства фирмы "Tallinna
Farmaatsiatehas", Эстония / 67, 113, 114, 159, 203/.
2.1.2. Характеристика используемых реактивов
В работе использовали следующие реактивы:
- тритон Х?100 —"MERK", Германия;
- пирен, 1?анилино-нафталин?8?сульфонат аммония (1,8?АНС), препарат
сывороточного альбумина человека (ЧСА) лиофизированный, НАДФН , акриламид —
"Reanal", Венгрия;
- тетрахлорметан (ТХМ) — "VKB Laborchemie", Германия;
- стабильный радикал дифенилпикрилгидразин (ДФПГ), синтезированный в Институте
органической химии НАН Украины.
- тест-наборы для экспресс определения активности ферментов в сыворотке крови
“Филисит-Диагностика”, Украина.
Остальные используемые для работы реактивы отечественного производства, марки
«осч» или «чда».
2.2. Объекты и модели исследования.
С целью решения задач, поставленных в настоящей работе, подбирали адекватные
объекты исследования и модели.
Исследования выполнены на крысах-самцах линии Вистар 3?х месячного возраста,
массой тела 150 – 200 г, которые содержались на стандартном рационе вивария -
получали воду и пищу ad libitum / 74/.
В качестве основных объектов исследования выступали изолированные мембраны ЭР
(микросомальная фракция) клеток печени и сыворотка крови крыс.
Моделью токсического поражения печени служила острая интоксикация
экспериментальных животных ТХМ - токсическая доза составляла 1 ЛД50. Вводили
ТХМ внутрибрюшинно из расчета 1,75 мл на 1 кг массы тела. Длительность
интоксикации составляла 24 часа, т.е. период, за который мембранотоксические и
генотоксические повреждения достигают своего пика. Животных декапитировали под
легким эфирным наркозом в утренние часы, учитывая суточную периодичность
митотического цикла / 30, 42, 43/.
Влияние ФАВ на микросомальные мембраны ЭР клеток печени крыс исследовалось in
vivo и in vitro.
Водные растворы вещества ПВ?4, Амизона и АСК вводили интоксицированным животным
внутрибрюшинно через 0,5 и 3 часа после введения ТХМ: вещество ПВ-4 из расчета
51,5 мг на 1 кг массы тела, Амизон из расчета 8,6 мг на 1 кг массы тела, АСК из
расчета 9 мг на 1 кг массы тела крысы.
Модель in vitro заключалась в изучении воздействия исследуемых препаратов и ФАВ
на изолированные мембраны ЭР клеток печени интактных (к
- Київ+380960830922