РАЗДЕЛ 2
ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В настоящей главе представлены объекты наблюдений, включающие больных генерализованным пародонтитом и лабораторных животных, а также клинические, экспериментальные и статистические методы исследования.
2.1. Экспериментальные исследования
2.1.1. Модель и группировка опытов. С целью обоснования использования в клинике МФ намацита и холекальциферола нами были проведены экспериментальные исследования на 43 белых крысах линии Vistar в возрасте 1,5-2 месяца весом 80-120 г (табл. 2.1).
Таблица 2.1
Распределение экспериментальных животных по группам
Номер
группКол-во
животных
(шт.)Моделирование
пародонтитаВиды лечебного воздействияПервая7??Вторая6+?Третья8+магнитотерапияЧетвертая8+магнитофорез с намацитомПятая6+магнитофорез с витамином D3Шестая8+магнитофорез смеси намацит + витамин D3
Пародонтит у крыс воспроизводили, моделируя у них явления метаболического ацидоза с помощью хлористого аммония, добавляемого с пищей в дозе 4 мг/г массы ежедневно в течение 1 месяца [58,140]. Через 2 недели после начала эксперимента животным в группах №№ 3, 4, 5 и 6 проводили лечебные мероприятия, указанные в табл. 2.1. Для фиксации крысу укладывали в специальный пластмассовый ящичек с отверстиями для головы и хвоста.
Магнитотерапию (МТ) проводили аппаратом ПДМТ-01 в режиме прямоугольной формы импульсного поля напряженности 20 мТл (3-я ступень), частоты 50 Гц, малыми индукторами по 10 минут ежедневно в течение 10 дней (как минимальный курс лечения), удерживая их в плотном контакте со щеками. Такой методикой МТ пользуется большинство авторов [56, 153]. Аппарат для МТ ПДМТ-01 (рис. 2.1)
производства Одесского завода "Промсвязь" 1989 г. выпуска (ТУ
45-8 9m3.293.000 ПС; прошел метрологический контроль 11.07.2003 акт № 182), предназначен для широкого применения в физиотерапевтических отделениях. Для научных целей в стоматологической области применяется впервые.
Рис. 2.1. Аппарат ПДМТ-01 с малыми индукторами.
Применяемые для МФ препараты намацит и холекальциферол разрешены Фармкомитетом для клинического применения. Намацит [63] использовался в виде 5 % водного раствора, приготовленного в лабораторных условиях путем растворения готового порошка. Оптимизация такой процентной концентрации намацита обоснована в работе [120]. Холекальциферол использовался в виде официнального препарата "Видехол" 0,25 % масляного раствора (Регистрационный № П/96/132/8 от 6.05.1996 Киевского витаминного завода) [151].
Для МФ на область десен накладывали марлевые салфетки, смоченные, соответственно принадлежности животных экспериментальным группам, 5 % раствором намацита, либо видехолом, либо их смесью 1:1. Режим магнитного воздействия применяли тот же, что и при МТ. Разработанная методика МФ используется для введения лекарственных средств в среды глаза, пародонт и др.[24, 63, 134].
Из эксперимента животных выводили методом декапитации. Объектом исследования служили костная ткань альвеолярного отростка и бедра, десна, печень и кровь крыс.
Выбор способа моделирования пародонтита с помощью хлористого аммония был сделан не случайно, он характеризуется физиологичностью и адекватностью клинических проявлений заболевания, а экспериментальные животные при достоверном развитии атрофии альвеолярного отростка челюстей прибавляли в весе одинаково с контрольными и по внешнему виду не отличались от них.
2.1.2. Биохимические методы. Кислотно-щелочное равновесие крови (рН, рСО2) определяли с помощью биологического анализатора фирмы "Раделкис". Диагноз ставили по номограммам [124].
Фруктозодифосфатаза (ФДФ) - один из 3-х регуляторных необратимых ферментов такого биосинтетического процесса как глюконеогенез, т.е. процесса образования глюкозы из неуглеводных продуктов: лактата, пирувата, глицерола, большинства аминокислот, главным образом, протекающего в печени при условиях закисления метаболитами, т.е. при ацидозе. Активность ФДФ мы определяли по методу Путилиной Л.Е. с соавт. [119].
Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа (Г6ФДГ) - регуляторный фермент пентозофосфатного пути окисления глюкозы. Этот биосинтетический путь особенно важен для синтеза пентоз, которые используются для образования нуклеотидов и нуклеиновых кислот, а также для образования восстановительных форм НАДФН+Н+, что необходимо для синтеза жирных кислот и стероидов. Активность этого фермента в тканях определяли по методу Kornberg B., Honecker A. [213].
Глутатионпероксидаза (ГлП) - фермент, защищающий клетки тканей и эритроциты от разрушающего действия перекисей водорода и липидов, обезвреживая их за счет восстановленного глутатиона. Перекиси липидов в повышенных концентрациях окисляют тиоловые группы ферментов (Г6ФДГ, ГК, ГАФДГ, СДГ и др.) и коферментов (глутатион, липоевая кислота и др.), чем инактивируют эти биокатализаторы, большинство из которых играют важную роль в энергетическом обмене. Активность ГлП определяли по методу Пахомовой В.А. с соавт. [141].
Исследовали содержание основных метаболитов: пирувата, лактата и фосфоэнолпирувата (ФЭП) методами, описанными Bergmeyer H.U. [184] и Асатиани В.С. [4].
Активность перекисного окисления тиолов, как белков, так и низко-молекулярных структур, оценивали по тиолдисульфидному соотношению SH/SS, уровень которого отражает ресурсы восстановленной антиоксидантно-активной серы в составе SH-групп белковых и других тиолов.
Активность ее участия в свободнорадикальном окислении устанавливали по количеству окисленной, уже принявшей участие в антирадикальной защите сере в составе SS-групп. Содержание -SH- и -SS- групп в растворимых и тканевых белках и низкомолекулярных соединениях определяли по методу Веревкиной И.В. [27].
2.1.3. Морфометрический метод. Атрофию альвеолярного отростка челюстей у экспериментальных крыс, как основной критерий развития пародонтита, определяли с помощью бинокулярного диссекционного микроскопа по Taylor (252 мкм) и выражали в процентах по методу Николаев