ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Характеристика и условия содержания экспериментальных
животных
Опыты проведены на 242 нелинейных половозрелых белых крысах массой 200 - 300г, 304 белых крысах линии Вистар массой 200 - 230г, 35 белых мышах массой 19 - 22г.
Животные находились в стандартных клетках с природным освещением, относительной влажностью воздуха 45 - 60% и температуре 18 - 21?С.
Рацион состоял из кормовой смеси для мелких лабораторных животных и свободного доступа к воде (поилки).
Каждой серии опытов соответствовала группа интактных животных, которым вводился физиологический раствор - мышам 0,1 мл, крысам - 0,5 мл.
Экспериментальные исследования планировались и проводились по согласованию с комиссией по биоэтике Института неврологии, психиатрии и наркологии АМН Украины.
2.2. Моделирование острого и хронического эмоционального
стресса
В работе были использованы две экспериментальные модели эмоционального стресса: острый и хронический.
Острый эмоциональный стресс моделировался в опытах на белых крысах на основе конфликта афферентных возбуждений (Ведяев Ф.П., 1975).. При этом животные помещались в специальную камеру, пол которой имел металлическую решетку. Действие условных раздражителей (свет - 150 Вт и звук 80 децибел) сочетался с болевым раздражением путем подачи электрического тока напряжением 20 вольт на решетчатый пол. Звук и свет включались апириодично на протяжении 2 часов. Это вызывало развитие эмоционального стрессового состояния.
Хронический эмоциональный стресс моделировался по методике Ф.П.Ведяева и Т.М.Воробьевой (1983). В экспериментальной камере на решетчатый металлический пол подавался электрический ток (1 - 100 вольт, в зависимости от индивидуального реагирования белых крыс). Длительность одного электрокожного раздражения составляла 10 сек. с интервалом 15 сек. Воздействие осуществляли на протяжении 1 часа, 5 раз в неделю, в течение 30 дней. Это приводило к развитию эмоционального стресса и объективно характеризовалось формированием стойкой артериальной гипертензии. Устойчивое повышение артериального давления регистрировалось через 1 месяц и выявлялось между электроболевым раздражением и после его прекращения. Стойкая артериальная гипертензия сохранялась у крыс в течение 1,5-2 месяцев после прекращения электрокожного раздражения.
2.3. Методы оценки триады Селье и других проявлений стресс-реакции
В первую очередь регистрировались показатели стресс-реакции согласно триаде Г.Селье, а именно коэффициенты массы тимуса и надпочечников (рассчитывались в процентах относительно общей массы животного) и состояние слизистой оболочки желудка (наличие и количество петехий, эрозий, изъязвлений).
Кроме того, в надпочечниках определялось содержание аскорбиновой кислоты и 11-оксикортикостероидов (11-ОКС), уровень 11-ОКС в плазме крови, коэффициент массы селезенки, число эозинофилов в периферической крови.
Объективными показателями последствий стрессорного воздействия служили нарушение функционирования сердечно-сосудистой системы (АД, ЭКГ), биоэлектрической активности мозга (ЭЭГ) и изменения суточной секреции катехоламинов (адреналина и норадреналина).
2.4. Регистрация уровня артериального давления
Измерение систолического артериального давления (АД) проводили электроплетизмографическим методом в хвостовой артерии с использованием графитного датчика, ртутного манометра и регистрацией пульсовой волны на экране индикатора импульсов "ИМ-789" (Пинелис В.П. и соавт., 1982).
Мониторинг АД проводили до электроболевого раздражения и затем через 0,5; 1, 2 и 24 часа после стрессорного воздействия. Далее ежедневно на протяжении всего опыта.
2.5. Регистрация электрокардиограмм
Запись ЭКГ выполняли при помощи прибора ЭК2Т-02 в трех стандартных отведениях, с применением стальных съемных электродов, прикреплявшихся к конечностям животных непосредственно перед исследованием. Скорость движения ленты устанавливалась на 50 и 100 мм/с.
Наряду с визуальным анализом электрокардиографических показателей проводили математический анализ ЭКГ. На основании данных показателей вычисляли частоту сердечных сокращений (ЧСС), интегральный показатель (ИП), напряженность сердечного ритма (НСР). Частоту сердечных сокращений определяли по формуле:
ЧСС = 100 ? 60/R - R (уд/мин.), где
100 - скорость движения ленты (мм/с);
60 - время (с);
R - R - средняя продолжительность сердечного цикла R - R (с).
Интегральный показатель дает возможность судить об адренергическом или холинергическом влиянии на сердечную мышцу (Соколов Е.И., Подачин В.П. и др., 1980). Значения ИП вычисляли по формуле:
(%), где
Р - амплитуда зубца Р (мВ);
Т - амплитуда зубца Т (мВ).
Находили моду (Мо) - значение наиболее часто встречающихся R - R интервалов. Мо указывает на наиболее вероятный уровень функционирования системы кровообращения.
Определяли амплитуду моды (Амо) - число кардиоинтервалов, соответствующее значению Мо. Амо отражает стабилизирующий (мобилизующий) эффект централизации управления ритмом сердца. Как правило этот эффект обусловлен влиянием симпатического отдела вегетативной нервной системы.
Определяли вариационный размах (?Х) - разность между самым коротким и самым длинным интервалами сердечного ритма. ?Х отражает суммарный эффект регуляции ритма вегетативной нервной системой.
На основании данных показателей вычисляли напряженность сердечного ритма (НСР) (Баевский Р.М. с соавт., 1984). Напряженность сердечного ритма как количественный показатель оценки процессов регуляции сердечного ритма находили по формуле:
НСР = Амо/2 ? ?Х ? Мо (у.е.).
По полученным в ходе работы записям ЭКГ определяли длительность R-R интервалов. В качестве количественной характеристики дыхательной аритмии мы использовали коэффициент аритмии (КА) (Цыбенко В.А., Янчук П.И., Егорова Л.С., Гмиро В.Е., 1996), который определяли по формуле:
Очевидно, что чем больше разниц
- Київ+380960830922