ГЛАВА 2
Материалы и методы исследования
2.1. экспериментальные модели
Животные были разделены на восемнадцать экспериментальных групп. Распределение
животных в экспериментальных группах представлено в таблице 2.1.
Таблица 2.1
Распределение крыс линии Вистар по сериям исследований
№ п/п
Серии исследования
Количество
животных
1.
Интактные животные
10
2.
Интактные животные с интраперитонеальными введениями
ХЦК26-33
10
3.
Здоровые животные с интрацеребровентрикулярным введением ХЦК26-33
10
4.
Здоровые животные с конъюнктивальными инстилляциями
ХЦК26-33
10
5.
Здоровые животные с интраперитонеальным введением физиологического раствора
(контроль)
10
6.
Здоровые животные с интрацеребровентрикулярным введением физиологического
раствора (контроль)
10
7.
Здоровые животные с конъюнктивальными инстилляциями физиологического раствора
(контроль)
10
8.
Животные с сахарным диабетом (3 недели)
10
9.
Животные с сахарным диабетом (5 недель)
10
10.
животные с сахарным диабетом (5 недель) с интраперитонеальными введениями
ХЦК26-33
10
11.
животные с сахарным диабетом (5 недель) с интраперитонеальными введениями
ХЦК26-33 и инсулина
10
12.
животные с сахарным диабетом (5 недель) с интрацеребровентрикулярным введением
ХЦК26-33
10
13.
животные с сахарным диабетом (5 недель) с интрацеребровентрикулярным введением
ХЦК26-33 и инсулина (интраперитонеально)
10
14.
животные с сахарным диабетом (5 недель) с инстилляциями на конъюнктиву обоих
глаз ХЦК26-33
10
15.
животные с сахарным диабетом (5 недель) с инстилляциями на конъюнктиву обоих
глаз ХЦК26-33 и инсулина (интраперитонеально)
10
Продолжение таблицы 2.1
№ п/п
Серии исследования
Количество
животных
16
животные с сахарным диабетом (5 недель) с интраперитонеальным введением
физиологического раствора (контроль)
10
17
животные с сахарным диабетом (5 недель) с интрацеребровентрикулярным введением
физиологического раствора (контроль)
10
18
животные с сахарным диабетом (5 недель) с инстилляциями на конъюнктиву обоих
глаз физиологического раствора (контроль).
10
итого
180
Исследования проведены на 180 крысах-самцах линии Вистар, массой 200-300 г в
осенне-зимний период (октябрь-февраль). Животные находились в условиях
естественного освещения при свободном доступе к воде и пище.
В каждой экспериментальной группе животных определяли количество потребленной
пищи и воды, измеряли массу животных, устанавливали концентрацию глюкозы и
гормонов в крови, взятой из центральных отделов сосудистого русла, проводили
глюкозотолерантный тест. Проводили заборы крови для исследования
морфометрических параметров эритроцитов, содержания и концентрации
катехоламинов и инсулина, определения активности СРО и состояния АОС. Все опыты
проводились в стандартных условиях в одно и то же время суток.
Сахарный диабет у крыс инициировали введением стрептозотоцина
(2-дезоксиметил-нитрозомочевинаглюкозопираноза), который обладает специфическим
b-цитотоксическим действием (M. Nukatsuka, 1990). Введение стрептозотоцина
приводило к дозозависимому увеличению продукции Н2О2 (T. Nobuyuki, 1991) и
активного кислорода, который не только вовлекается в процесс развития диабета,
но и играет роль в возникновении осложнений (L.W.Oberley, 1988). Все это
сопровождалось фрагментацией ДНК, что приводит к активации процессов репарации
с помощью фермента поли-АДФ-рибосинтетазы, который как кофермент использует НАД
и таким образом способствует использованию его запасов в b- клетках и их
деструкции. Морфологические изменения в эндокринной части поджелудочной железы
проявлялись появлением b- клеток неправильной формы уже через 4 часа после
введения стрептозотоцина, а агрануляция клеток - через 24 часа (Y. Ozawa,
1990). Позднее развивалась мононуклеарная инфильтрация островка Лангерганса,
сменяемая лимфоцитарной инфильтрацией. Инфильтрирующие клетки начинали активно
продуцировать цитокины (интерлейкин-1, фактор некроза опухолей и интерферон-g)
(I.L. Campbell, 1990; C. Hellerstrom, 1991), происходило расширение и
вакуолизация эндоплазматического ретикулума в отдельных b-клетках (R. Jablenska
1991; T. Seiichiro, 1988), т.е. развивался инсулит, который, в свою очередь,
приводил к повреждению и деструкции b-клеток с развитием инсулиновой
недостаточности. Тяжесть течения заболевания прямо зависела от дозы вводимого
стрептозотоцина.
Для моделирования диабета животным внутрибрюшинно вводили стрептозотоцин (SIGMA
Chemical, США) в дозе 50 мг/кг, растворенный в 0,5 мл 0,1 М цитратного буфера
(рН 4,5) непосредственно перед введением. Такая доза стрептозотоцина не
приводила к развитию абсолютной инсулиновой недостаточности, но вызывала
повреждение b-клеток с последующим развитием инсулита [223]. С этого момента
производился отсчет времени развития диабета (3 недели и 5 недель).
В поджелудочной железе экспериментальных животных уже к концу 2-й недели от
начала заболевания наблюдались признаки деструкции панкреатических островков и
гибель b- клеток. При иммунноцитохимическом исследовании гистологических срезов
поджелудочной железы установлено снижение содержания и концентрации инсулина в
b-клетках островков, повышение содержания и концентрации глюкагона в a-клетках.
Концентрация инсулина в крови при моделировании диабета снижалась, а глюкагона
и соматостатина в крови повышалась.
У экспериментальных животных данный способ моделирования диабета приводил к
постепенному развитию симптомов, сопровождающих инсулинзависимый диабет у
человека: снижение веса, полифагию, полидипсию. В гистологических срезах
поджелудочной железы крыс иммуннофлюоресцентным методом было установлено
уменьшение количества b-
- Київ+380960830922