РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
С целью получения объективной информации о влиянии нарушения полового созревания на структурно-функциональные свойства костной ткани девочек пубертатного возраста на санаторно-курортном этапе реабилитации у 173 детей был проведен комплекс клинико-инструментальных исследований.
Под наблюдением находилось 173 девочки, поступившие в детский клинический санаторий "Здравница" г. Евпатории в 2003-2006 гг. в возрасте от 13 до 17 лет (средний возраст 15,3±2,2). Из них 60 больных с задержкой полового развития, 31 - с нарушением овариально-менструального цикла по типу полименореи, 22 - с вторичной аменореей и 40 - с олигоменореей; 20 здоровых детей вошли в контрольную группу, сопоставимую по полу и возрасту. Диагноз устанавливался согласно МКБ-Х. В исследование не включались дети с дисгенезией гонад, постнатальной формой адреногенитального синдрома, гипофизарным нанизмом, сахарным диабетом и ожирением. Во всех группах изучался анамнез жизни, гинекологический и соматический анамнезы, становление и характер менструальной функции. Кроме общего и гинекологического осмотров, всем больным проводились общепринятые клинико-лабораторные методы обследования: общий анализ крови, определение содержания глюкозы в сыворотке крови, общий анализ мочи, бактериоскопический анализ отделяемого из влагалища. Обследование включало также консультации смежных специалистов - ортопеда, эндокринолога, стоматолога, оториноляринголога.
2.1. Оценка физического развития девочек.
Для оценки физического развития измеряли массу тела (кг), рост (см), окружность грудной клетки (см), индекс массы тела. Оценка физического развития девочек проводилась по данным А.Н. Баранова [32].
2.2. Оценка полового развития девочек с патологией пубертатного периода (задержка полового развития, вторичная аменорея, олигоменорея, полименорея).
Оценка выраженности вторичных половых признаков проводилась по трехбальной системе, и вычислялся суммарный "балл полового развития" по формуле - Ma+P+Ax+Me, где каждый признак имеет свой символ и свой коэффициент: молочные железы - Ma (1,2 балла), оволосение лобка - P (0,3 балла), аксиллярное оволосение - Ax (0,4 балла), характер менструального цикла - Me (2,1 балла) [32].
Оценка полового развития у девочек 13-15 лет проводилась по стандартам М.В. Максимовой [32].
Определение степени оволосения проводилась по шкале Ferriman и Galway [2, 32].
Для оценки эндокринной функции яичников у девочек пубертатного возраста использовали тесты функциональной диагностики (ТФД). Нами проводилось цитологическое исследование влагалищного отделяемого с подсчетом вагинальной формулы, кариопикнотического индекса и измерение базальной температуры по стандартным методикам [2, 32].
Для определения уровня белковых и стероидных гормонов (фолликулостимулирующего (ФСГ), лютеинизирующего (ЛГ), пролактина (ПРЛ), эстрадиола (Е2), прогестерона (П), кортизола (К), тестостерона (Т)) в сыворотке крови мы применяли иммуноферментный метод с использованием диагностической системы "Хема-Медика" (Москва).
В качестве материала исследования использовалась сыворотка крови девочек. Кровь брали из локтевой вены утром в условиях физиологического покоя, натощак, в количестве 5 мл до лечения и после лечения. У здоровых девочек и девушек с полименореей кровь брали на 5-7 день менструального цикла, для определения уровня прогестерона - во вторую фазу цикла. У больных с задержкой полового развития, вторичной аменореей и олигоменореей - на 3 день срочной адаптации. Кровь центрифугировали 30 минут при 1500 об/мин, сыворотку собирали и сохраняли в ампулах при минус 20?С до проведения исследования. Для интерпретации результатов пользовались нормативами, предложенными фирмой "Хема-Медика" для данных реактивов.
Ультразвуковое исследование (УЗИ) проводили методом трансабдоминальной эхографии, в условиях достаточно наполненного мочевого пузыря в режиме реального масштаба времени по стандартной методике, датчиком с частотой 3,5 МГц на аппарате Lagic 100MP. Интерпретацию результатов проводили согласно данным В.Ф. Коколиной [32].
2.3. Исследование минеральной плотности костной ткани путем определения уровня кальция, фосфора, магния в сыворотке крови и проведения ультразвуковой денситометрии.
Для определения уровня магния в сыворотке крови мы применяли набор реактивов для фотометрического определения в биологических жидкостях "SIMKO Ltd", Украина.
Принцип метода: в щелочном растворе магний образует с индикатором кальмагитом окрашенный комплекс, который определяют фотометрически при длине волны 520 нм. Для постановки реакции смешивали в пластиковой посуде 1 объем реагента (буферный раствор) с 1 объемом реагента 2 (раствор индикатора) и хорошо перемешивали. К 3,00 мл рабочего реагента для определения магния прибавляли 0,05 мл исследуемой сыворотки. Смесь перемешивали. Одновременно ставили также калибровочную пробу (3,00 мл рабочего реагента + 0,05 мл стандарта магния). Выдерживали 5 минут при комнатной температуре и колориметрировали при длине волны 520 нм на спектрофотометре против контроля в 1,0 см кювете. Контроль: к 3,00 мл реагента прибавляли 0,05 мл дистиллированной воды.
Содержание магния рассчитывали по формуле:
Магний (ммоль/л) = Еиссл x 0.823ммоль/л ? Ест,
где Еиссл и Ест - поглощение, соответственно, исследуемой пробы и стандартного образца с концентрацией 0,823 ммоль/л.
Интерпретацию полученных результатов проводили согласно унифицированным физиологическим нормам (приказ Минздрава СССР №29).
Для определения общего кальция в сыворотке крови мы применяли набор реактивов для фотометрического определения в биологических жидкостях "Филист Диагностика", Украина.
Принцип метода: в щелочной среде ионы кальция реагируют с о-крезолфталеиновым комплексоном и образуют цветной комплекс. Интенсивность окраски комплекса фиолетового цвета пропорциональна концентрации кальция в исследуемой пробе.
Для постановки реакции смеш