РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ
Нами було проведено комплексне біохімічне обстеження 138 хворих на псоріаз та
26 здорових осіб, які складали контрольну групу. Всі лабораторні дослідження
проводились на базі 2-ї міської клінічної поліклініки м. Львова. Визначали
показники білкового обміну, а саме: вміст загального протеїну, сечовини,
альбумінів у сиворотці крові, процентне співвідношення білкових фракцій, рівень
тимолової проби; ліпідного - вміст загальних ліпідів, в-ліпопротеїдів,
тригліцеридів, холестеролу; вуглеводневого - концентрацію глюкози,
серомукоїдів; активність аланінаміно- та аспартатамінотрансфераз (АлАТ, АсАТ),
амілази сироватки крові; вмісту жовчних пігментів, зокрема, концентрацію
білірубіну.
Визначення біохімічних тестів проводилося на концентраційному фотоелектричному
колориметрі КФК – 2 Загорського оптико-механічного заводу (виробничого
об’єднання «ЗОМЗ»).
КФК – 2 призначений для вимірювання в окремих ділянках діапазону довжин хвиль
від 315 до 980 нм, які виділяються світлофільтрами певного коефіцієнту
пропускання (від 100 % до 5 %) і оптичної щільності (від 0 до 1,3) рідинних
розчинів і твердих тіл, а також для визначення концентрації речовин у розчинах
методом побудови калібрувальних графіків [6]. В якості джерела світла в
колориметрі використовувалася лампа накалювання – 6,3 В, 15 Вт. Світлову
енергію сприймали фотоелементи Ф – 2А при роботі в спектральній ділянці 315 –
540 нм та ФД – 24к – при 550 – 980 нм. Оптична система – однопроменева.
2.1. Принцип визначення загального білка в сироватці крові базувався на основі
реакції поліпептидів у лужному середовищі з сульфатом міді з наступним
утворенням сполуки, яка зафарбовувалася в фіолетовий колір (біуретова реакція)
[65]. Вимірювання здійснювалися фотометрично в кюветі з товщиною шару 1 см при
довжині хвилі 540 нм проти контрольної проби (замість сироватки додавали 0,1мл
дистильованої води).
2.2. Визначення білкових фракцій сироватки крові здійснювались за методом Ома і
Маккорда з метою розділення їх на 5 основних фракцій шляхом висолювання
нейтрофільними солями. При цьому, різна концентрація солей осаджувала різні
фракції білків [39]. Вимірювання проводилися в кюветі з товщиною шару 1 см при
довжині хвилі 670 нм (червоний світлофільтр) відносно контролю.
2.3. Тимолова проба розраховувалася за визначенням ступеня помутніння в
результаті реакції осаду тимоловим реактивом сироваткових в-глобулінів, г
–глобулінів та ліпопротеїдів при рН = 7,55 з утворенням
глобулін-тимол-ліпідного комплексу. У залежності від кількості і взаємного
співвідношення окремих білкових фракцій під час вказаної реакції виникало
помутніння, інтенсивність якого вимірювалася турбодиметрично при довжині хвилі
670 нм, товщині шару кювету 1 см порівняно з водою. Розрахунки здійснювались за
калібрувальним графіком [34].
2.4. Принцип визначення вмісту сечовини полягав в тому, що в присутності
тіосемикарбазиду та іонів трьохвалентного заліза сечовина утворювала з
диацетилмонооксином в сильно кислому середовищі червоний комплекс, який
фотометрували при довжині хвилі 490-540 нм, товщині шару - 1 см [54], порівняно
з контрольним розчином.
2.5. Вміст загального білірубіну в сироватці крові визначався за методом
Ієндрашика [16], суть якого в наступному: при додаванні до сироватки крові
кофеїнового реактиву некон’югований (незв’язний, непрямий) білірубін переходить
у розчинний дисоційований стан і разом зі сумішшю діазореактивів (сульфанілова
кислота та нітрит натрію) дає рожеве забарвлення. За інтенсивністю забарвлення
через 20 хвилин визначалася концентрація загального білірубіну. Вимірювання
проводилося на ФЕКу через при довжині хвилі 500 – 560 нм (зелений світлофільтр)
у кюветі з товщиною шару 0,5 см порівняно з водою. Розрахунок здійснювався за
калібрувальним графіком [16].
2.6. В основі наборів для визначення активності аланінаміно-трансферази (АлАТ)
та аспартатамінотрансферази (АсАТ) закладений уніфікований
динітрофенілгідразиновий метод Райтмана-Френкеля [6]. Принцип визначення
активності АлАТ полягав у реакції каталізації трасамінування між D,L-аланіном і
2-оксоглутаратом, внаслідок якої вони перетворювалися на L-глутамат і сіль
піровиноградної кислоти. Визначення ґрунтувалося на вимірюванні оптичної
щільності зафарбованих 2,4-динітрофенілгідразином гідразонів 2-оксоглутарової і
піровиноградної кислот у лужному середовищі. Розрахунок проводили за допомогою
калібрувального графіка. Вимірювання здійснювалося в кюветі з товщиною шару
1см, довжиною хвилі 500-560нм проти контролю.
2.7. Активність аспартатамінотрансферази (АсАТ) визначалася на основі реакції
каталізації трансамінування між D,L-аспартатом і 2-оксоглутаратом, у результаті
якої вони перетворювалися на L-глутамат і оксалацетат [43, 70, 139, 183, 263],
оптична щільність яких на калібрувальному графіку пропорційна активності
ферменту в сироватці крові. Вимірювання здійснювалося в кюветі з товщиною шару
1см, довжиною хвилі 500 - 560нм проти контролю [65].
2.8. Активність амілази визначалася за допомогою амінокластичного методу за
Каравеєм зі стійким нерозчинним субстратом [54]. Принцип вимірювання полягає в
тому, що амілаза гідролізує розщеплення крохмалю з утворення кінцевих
продуктів, що дають кольорову реакцію з йодом (синього кольору). Оцінку
проводилося за ослабленням інтенсивності забарвлення. Вимірювання здійснювалося
при товщині кювети - 1см, довжині хвилі 670 нм (червоний світлофільтр) у
порівнянні з водою.
2.9. Рівень серомукоїдів сироватки крові визначають турбодиметричним методом,
суть котрого в наступному: при додаванні до сироватки
- Київ+380960830922