<p>РАЗДЕЛ 2<br /> <br /> МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ<br /> 2.1. Особенности биологии Arabidopsis thaliana (L.) Heynh.<br /> Арабидопсис Таля - однолетнее двудольное растение из семейства Крестоцветных, формирующее розетку листьев и соцветие в виде открытой кисти, характерной для большинства представителей этого семейства. Весь цикл развития арабидопсиса можно разделить на две стадии.<br />1. Вегетативная стадия, которая делится на два этапа:<br /> а) Развитие розетки листьев (протяженность этапа - от 2.5 недель до 1 месяца). Первые настоящие листья появляются через 5-7 дней после появления всходов и отличаются от семядольных наличием трихом. На этом этапе междоузлия побега сокращены, латеральные меристемы в пазухах листьев развиваются как вегетативные.<br /> б) Развитие вегетативной части цветоноса. Латеральные меристемы развиваются в пазухах стеблевых листьев как вегетативные, образуя боковые побеги (паракладии). Первые стеблевые листья, расположенные близко к розетке, можно отличить от розеточных по характеру расположения трихом (трихомы начинают появляться на нижней поверхности листьев, в то время как листья розетки имеют трихомы только на верхней стороне). На этом этапе междоузлия побега удлиняются и цветонос выносится над поверхностью розетки (этап длится несколько дней).<br /> 2. Стадия формирования соцветия. Прицветные листья (брактеи) редуцированы; латеральные меристемы развиваются как флоральные (цветковые). Цветок состоит из четырех чашелистиков, четырех лепестков, четырех-шести тычинок и пестика из двух плодолистиков. Созревание пыльцы и раскрытие пыльников происходит еще в закрытом цветке, что обеспечивает попадание собственной пыльцы на рыльце пестика. <br /> В природе арабидопсис размножается преимущественно за счет самоопыления и самооплодотворения. В естественных популяциях с частотой 1-5% происходит аутбридинг, получены доказательства энтогамной гибридизации [126]. В лабораторных условиях при густом посеве частота спонтанной гибридизации колебалась от 0.0 до 9.2 % (в среднем 1.2 %) [171].<br /> Распространен Arabidopsis thaliana почти повсеместно: Европа; Северная, Восточная и Южная Африка; почти вся Азия, в том числе Индия и Китай; Австралия; Северная Америка [9; 113, 114, 115]. Доходит почти до Северного полярного круга (до 65? с. ш.), произрастает как в долинах, так и в горах на высотах до 3000 м [9, 114].<br /> Стручок обычно содержит от 40 до 60 семян. Растение дикого типа формирует от 20 до 40 стручков на главном побеге. На растениях, развивающихся в пробирке, стручков и семян как правило меньше. <br /> Продолжительность отдельных стадий и общая продолжительность жизненного цикла зависит как от условий выращивания, так и от особенностей конкретной расы. В пределах обширного видового ареала арабидопсиса расселено большое количество рас, различающихся по морфо-физиологическим показателям: озимые и яровые, ранние и поздние, с наличием или отсутствием периода глубокого покоя у семян и т.д. [26]. Растения длительно вегетирующих рас обычно имеют более мощный габитус и более высокую урожайность семян. <br /> Выбор расы для проведения исследований определяется целями экспериментов. Среди наиболее часто используемых рас Columbia обладает наиболее протяженным циклом развития (2 месяца в пробирочной культуре, 3.5 месяца в почве) и высокой урожайностью. Раса Dijon обладает коротким жизненным циклом (1.5-2 месяца) и довольно низкой урожайностью. Раса Koln и лабораторная линия Landsberg erecta занимают промежуточное положение по этим показателям.<br /> Свежесобранные семена большинства рас практически не всхожи - они находятся в состоянии покоя, связанном с высоким содержанием абсцизовой кислоты в оболочке семени. Период покоя, во время которого происходит частичное разрушение абсцизовой кислоты, длится около 1 месяца. Для прерывания покоя используют холодовую обработке семян или проращивают их в присутствии гиббереллина. При необходимости можно высевать на питательную среду недозревшие семена, еще не вошедшие в период покоя, из выполненных, но еще зеленых стручков. Такой прием может позволить получить до 8-10 поколений в год для рас с коротким периодом вегетации. Семена арабидопсиса хранятся в лабораторных условиях без существенной потери всхожести не более 3-4 лет.<br /> <br /> 2.2. Характеристика мутантных линий арабидопсиса<br /> Материалом для создания новых рекомбинантных линий послужили линии, семена которых были получены нами из Ноттингемского центра по поддержанию генетической коллекции арабидопсиса (Nottingham Arabidopsis Stock Centre, NASC). Это линии по рецессивным генам ap1-1, bp-1, ch1-1, ch5-1, clv1-1, cp2-1, dis2-1, gl1-1, min-1 и tfl1-2 [164], общая характеристика которых приведена в таблице 2.1.<br /> Взятые в эксперимент мутантные линии по генам ap1-1, bp-1, ch1-1, ch5-1, clv1-1, cp2-1, dis2-1, gl1-1, min-1 и tfl1-2 получены на основе чистой линии, авторское название Landsberg erecta, фенотип ? прямостоячий (эректоидный) стебель. Анализируемые гены находятся в генотипе этой линии в гомозиготном состоянии ? AP1-1AP1-1BP-1BP-1CH1-1CH1-1CH5-1CH5-1CLV1-1CLV1-1CP2-1CP2-1DIS2-1DIS2-1er-1er-1MIN-1MIN-1TFL1-2TFL1-2. Таким образом, исходные мутантные линии отличаются от линии Landsberg erecta только по одному гену er, а по отношению к дикому типу являются двойными рецессивами. <br /> <br /> <br /> Таблица 2.1<br /> Общая характеристика линий Arabidopsis thaliana<br /> из коллекции NASC<br />Символ аллеляНазвание линииФенотипХромосома/ сайтer-1ErectaПрямостоячий (эректоидный) стебель2/48<br />ap1-1ApetalaЛепестки отсутствуют или рудиментарны1/99bp-1BrevipedicеllusКороткие цветоножки, плоды повернуты вниз4/15ch1-1ChlorinaЖелто-зеленое растение, пониженная жизнеспособность1/58ch5-1ChlorinaЖелто-зеленое растение5/43сlv1-1ClavataБулавовидные плод1/110cp2-1CompactaПолукарлик2/38dis2-1Distorted trichomesКороткие, изогнутые трихомы на стебле и листьях1/45gl1-1GlabraТрихомы на розеточных листях отсутствуют3/46tfl1-2Terminal flowerВерхушка стебля (соцвети</p>
- Київ+380960830922