раздел 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Работа проведена на 518 белых половозрелых крысах линии Вистар, массой
180,0-230,0 грамм.
Модель устойчивого патологического состояния мозга у крыс создавали путем
внутрижелудочного введения сиднокарба в дозе 5 мг/кг 2 раза в день на
протяжении 14 суток [20,22,26]. Регистрируемые показатели поведения и памяти у
животных тестировали через 30 минут после последнего введения сиднокарба на 3,
7 и 14 сутки моделирования психотических расстройств.
Для изучения фармакологической активности в условиях формирования УПС мозга,
вызываемого сиднокарбом, использовали следующие психофармакологические
средства: аминазин - 5 мг/кг, галоперидол - 0,25 мг/кг, сульпирид - 100 мг/кг,
мелипрамин и амитриптилин - по 2,5 мг/кг, налоксон – 2 мг/кг. Препараты вводили
в дозах, которые у лабораторных животных, в первую очередь у крыс, оказывали
существенное влияние на условно-рефлекторную деятельность и память [252,253].
Исследуемые лекарственные средства (аминазин, галоперидол, мелипрамин,
амитриптилин и налоксон) вводили внутрибрюшинно, а сульпирид - внутрижелудочно
через 15-20 минут после последнего применения сиднокарба. Животным контрольной
группы в количестве 1 мл/кг массы вводили изотонический раствор хлористого
натрия. Регистрируемые поведенческие и нейрохимические показатели определяли
через 30 - 40 минут после применения ЛС.
Изменения показателей поведения крыс на фоне действия психофармакологических
средств у интактных животных и при устойчивом патологическом состоянии мозга
определяли в установке «открытое поле» размером 100 на 100 см с расстояниями
между «ложными» норками 10 см. О горизонтальной двигательной активности (ГДА)
судили по количеству полностью пересеченных квадратов в течение 3 минут, об
исследовательской вертикальной двигательной активности (ВДА) - по числу
подъемов на задние лапы, об эмоциональной реактивности – по количеству болюсов
дефекации (КБД), о безусловно-рефлекторной деятельности – по количеству
обследованных норок (КОН). Наряду с этими показателями регистрировали
продолжительность грумминга (Гр) в секундах во время тестирования [254].
Для определения степени агрессивности у каждой пары исследуемых крыс в камере
размером 30 на 25 см с электрифицированным полом определяли порог (в вольтах)
электрокожного болевого раздражения (ПРА) при подаче которого у крыс
развивались вокализация, а затем схватки [255].
Об изменениях памяти судили по условной пассивно- и активно-оборонительной
реакции [256,257].
Выработку активно-оборонительного условного рефлекса (УРАИ) проводили в
У-образном лабиринте с электрифицированным полом [256,257]. Для выработки УР
крыс помещали на стартовую площадку ствола лабиринта и в одном из двух других
ходов включали свет. На 5-й секунде на пол подавали электрический ток, по
величине равный болевому порогу каждого животного (в среднем 40 В). Избавиться
от возникающего при этом электрокожного раздражения крыса могла лишь путем
побежки в освещенный ход. Через 30 секунд крысу возвращали на стартовую
площадку и описанная процедура повторялась. Постепенно, по мере сочетания
условного и болевого раздражителя, у животного формировался условный рефлекс
избегания в виде побежки в освещенный рукав, наступавшей до нанесения
безусловного (электрокожного ноцицептивного) раздражителя в ответ на условное
(световое) воздействие.
В первом опыте выработку УР проводили до достижения 10 безошибочных избавлений
и избеганий подряд. Для упрочения реакции животных обучали на протяжении еще 13
сессий, включавших по 10 сочетаний светового и болевого раздражителей, по 6 раз
в неделю. Влияние на УРАИ исследуемых препаратов определялось на 14 сутки
введения крысам сиднокарба, после последнего его применения, когда у животных
были зарегистрированы изучаемые показатели поведения в тесте «открытое поле» и
порог развития реакции агрессивности.
Изучение механизмов действия исследуемых групп психофармакологических средств
проводилось путем определения концентрации катехоламинов (адреналина,
норадреналина) в структурах головного мозга экспериментальных животных.
Мозговые образования, которые были выбраны для изучения, по данным
нейрофизиологических [258-259] и ряда нейрохимических показателей [257],
участвуют в формировании мнестических процессов. В число исследуемых структур
центральной нервной системы крыс входили: фронтальная зона неокортекса (ФК),
полосатое тело (ПТ), зрительный бугор (таламус), преимущественно его медиальная
часть (МТ), Варолиев мост (ВМ) и морской конек или гиппокамп (Гп).
Животных декапитировали под мягким эфирным наркозом. Структуры из головного
мозга выделялись на холоде, взвешивались и тут же гомогенизировались в
охлажденной хлорной кислоте в соотношении 1:10. Полученный кислый гомогенат в
этот же день использовался для определения уровня изучаемых катехоламинов.
Измерение адреналина и норадреналина, в исследуемых тканях проводили
спектрофлюориметрически после предварительной адсорбции на окиси алюминия [260]
.
Для определения концентрации нейроспецифического белка S-100 были
использованы: спектрофотометр для микропланшет “Humareader” (Германия),
оснащенный микрокомпьютером для анализа данных Hewelett Packard,
ультрацентрифуга VAC 25 (“MLM”, Germany). Реактивы: для получения фракции
мембранного белка использовали: тритон Х-100 (“Sigma”, USA), b-меркаптоэтанол
(“Ferak”, Germany), фосфометилсульфонилфторид (Merk,Germany),
трис(гидроксиметил)аминометан (Merk, Germany).Для иммуноферментного
определения: для выделения S-100, использовали конканавалин-А-сефароз
- Київ+380960830922