РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Выбор экспериментальных животных
Выявление и анализ факторов и механизмов, определяющих устойчивость к
экстремальным факторам, особенности адаптивных процессов, должны предполагать
предварительную классификацию взятых в наблюдение животных по способности
отвечать на воздействие. Достижение последнего, с одной стороны, упрощается
использованием линейных животных. Однако даже в этом случае не устраняются
проявления индивидуальных различий адаптации к повреждающему фактору. Так, по
данным Судакова К.В. и соавт. (1981), в условиях модели 30-часового
иммобилизационного стресса погибает 23,6 % крыс линии Август. Среди животных
линий Вистар и Вэг доля предрасположенных к сердечно-сосудистым нарушениям при
стрессе составляет соответственно 6,8 % и 9,6 %. С другой стороны, среди
рандомбредных животных наиболее широко представлены различные типы реакций на
возмущающее воздействие [118]. В связи с вышесказанным, моделирование
экстремальных воздействий было решено проводить на нелинейных животных. Всего в
эксперимент взяты 81 кролик-самец породы Шиншилла с массой тела от 2 до 3.2 кг
и 179 крыс-самцов с массой тела от 210 до 250 г и 16 взрослых беспородных собак
массой тела от 9 до 15 кг . Животных содержали в стандартных условиях вивария и
при проведении экспериментов строго соблюдались международные правила ”Guide
for the care and use of laboratory animals”.
Экспериментальные модели исследования
Как следует из обзора литературы, адаптивные реакции и устойчивость организма к
действию экстремальных факторов различной природы, обязательным компонентом
ответной реакции на которые является повышение уровня симпатомиметиков, в
значительной мере связана с адренореактивностью органов и тканей, в том числе,
и в первую очередь, - миокарда. O последней можно судить на основе анализа
адренергических реакций целостного организма и изолированных органов на
введение экзогенных симпатомиметиков. Использование в качестве экстремального
воздействия нагрузки организма аналогами биологически активных веществ является
принятым экспериментальным подходом [55, 68, 75, 77, , 263, 330]. При этом
использование катехоламинов многими считается наиболее обоснованным [83]. Такая
модель достаточно подробно имитирует комплекс неспецифических адаптационных
реакций организма на повреждение [49], причем мощность адренергических реакций
миокарда может детерминироваться местными, тканевыми факторами [13],
особенностями функционирования внутриклеточных механизмов трансдукции
гуморальных сигналов [16], и баланса гуморально-метаболических систем регуляции
[6, 7].
В качестве экстремального воздействия на организм использовали нагрузку
экзогенным b-симпатомиметиком изадрином. Однопроцентный раствор изадрина
вводили кроликам подкожно однократно в дозе 6 мг/кг массы тела. Концентрация
изадрина была подобрана опытным путем. Она обеспечивала гибель порядка 40 %
взятых в наблюдение животных в течение первых 30 минут после введения
препарата. Нагрузка животных критическими дозами изадрина – естественная модель
разрешения чрезмерных влияний разной природы и удовлетворяет решению задачи
определения роли различных систем в устойчивости организма к действию
экстремальных факторов [75, 77, 148, 275].
Роль местных (тканевых) факторов в устойчивости к нагрузке изадрином изучали на
модели изолированного миокарда. Поскольку «токсические» эффекты катехоламинов
реализуются через систему внутриклеточного кальция [79, 82], в качестве объекта
исследования избрали тотально ишемизированный миокард. Условия такого
эксперимента позволяют минимизировать влияния на конечные результаты
индивидуальных особенностей в системе активации энергозависимых кальциевых
каналов [3].
Дополнительно к опытам на изолированном миокарде в модельных экспериментах in
vitro изучали антиокислительный потенциал препаратов очищенного миоглобина из
мышцы сердца собаки (серия M 8007, "Sigma Chemical Company", USA) Оценивали
влияния различных концентраций миоглобина на скорость переокисления липидов в
сыворотке крови 18 интактных крыс и в суспензии желтка куриных яиц. В качестве
системы, генерирующей свободные радикалы, использовали растворы двухвалентного
железа [59]. Исследуемые концентрации миоглобина - от 50 до 500 нг/мл.
Были проведены также модельные эксперименты для выяснения механизмов влияния
фосфотидилхолиновых (лецитиновых) липосом на уровни эндогенных простаноидов.
Для этого использовали сыворотку крови 40 интактных крыс, разделенную на 4
группы:
интактная сыворотка;
сыворотка с добавлением липосом (10:1);
сыворотка, содержащая систему, инициирующую свободноради-кальные реакции (25
ммоль/л раствор сернокислого железа; 10:1);
сыворотка, содержащая липосомы и раствор двухвалентного железа (10:1).
Суспензию липосом готовили из фармакологического препарата «Липин» («БИОЛЕК»,
г. Харьков) путем растворения 50 г Липина в 100 мл физиологического раствора.
2.3. Характеристика групп экспериментальных животных
Для спектрального анализа ритма сердца при воздействии изадрином поставлены
опыты на 18 половозрелых кроликах-самцах породы «Шиншилла», находившихся до
эксперимента в условиях свободного поведения в виварии. По результатам
экспериментов погибло 7 животных. Смерть наступала в первые 12- 27 минут после
нагрузки изадрином.
Для выяснения роли гуморальных систем в устойчивости животных к экстремальной
дозе изадрина использовали 45 кроликов, адаптированных к условиям
экспериментальной лаборатории, которым подкожно однократно вводили раствор
изадрина. Погибло 17 кроликов (1-ая группа). Сразу же после наступления
кли
- Київ+380960830922