РОЗДІЛ 2.
МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
2.1 Клінічні методи
Основним методом, що дозволяв встановити наявність при народженні у дитини затримки внутрішньоутробного розвитку, була оцінка гестаційної зрілості дитини за Дубовичем. ЗВУР діагностували в тому випадку, якщо індекс морфофункціональної зрілості відставав від справжнього гестаційного віку більше, ніж на 2 тижні. Клінічний варіант (синдром) ЗВУР визначався на основі аналізу антропометричних та клінічних даних, за рекомендаціями, викладеними у відповідних посібниках для лікарів-неонатологів [92].
Всі новонароджені зі ЗВУР підлягали ретельному клінічному обстеженню. Щоденно проводилася оцінка соматичного та неврологічного статусу, вивчалася динаміка маси тіла. Поряд з клінічними методами обстеження, новонародженим основної та контрольної груп проводився комплекс лабораторних та інструментальних дослідженнь, що включав аналіз периферичної крові на аналізаторі "Swelab" (Фінляндія), аналізи сечі, калу; біохімічний контроль передбачував дослідження у плазмі крові білірубіну, загального білку, глюкози, АлАТ, АсАТ, тимолової проби, холестерину, триглицеридів, амілази, електролітів (калій, натрій, іонізований кальцій, фосфор, магній). Всім дітям проведено нейросонографічне обстеження в динаміці. Водночас з рентгенологічним дослідженням легенів і серця визначалася наявність тимомегалії та ступінь збільшення загруднинної залози у відповідності з класифікацією Ю.П. Ткаченка [117]. З метою вивчення особливостей контамінації кишківника новонароджених з затримкою внутрішньоутробного розвитку мікроорганизмами, проводився дозований посів калу.
В якості одного з методів оцінки зрілості новонародженої дитини ми використовували визначення вмісту в плазмі крові новонароджених, імуноферментним методом, ?1-фетопротеїну, за допомогою комерційного набору " AFP KiT " California USA.
2.2. Методи оцінки ендокринного статусу
Вміст гормонів вивчався нами в плазмі крові дітей. Взяття крові проводилося в ранкові часи з 800 до 1000 з периферийної вени. Відділену плазму (сироватку) розливали в мікропробірки з кришкою типу "Еппендорф" і розміщували на зберігання в морозильній камері з температурою -180С.
Визначення рівня гормонів в плазмі крові проводилося за допомогою комерційних діагностичних наборів вітчизняного та закордонного виробництва.
Функціональний стан гіпофізарно-тиреоїдної системи вивчався на основі дослідження в плазмі крові дітей ТТГ (набор "ТироидИФАТТГ", ЗАО "Алкор Био", Росія), Т3 та Т4 (" РИО-Т3-ПГ", "РИО-Т4-ПГ" виробництва інституту біоорганічної хімії АН Беларусь). Вміст соматотропного гормону (набор "СТГ-ИФА"), пролактину (набор "ИФА-Пролактин"), кортизолу (набор "ИФА-АФ-Кортизол") визначали імуноферментним методом з використанням комерційних наборів ЗАО "Алкор Био", Росія.
Внутрішньосекреторна функція загруднинної залози вивчалася за рівнем ключового гормону тимусу - ?1-тимозину з використанням набору "Thymozin ?1" виробництва фірми Immundiagnostic GMBH (Німеччина).
2.3. Методи оцінки імунного статусу
Субпопуляційний склад лімфоцитів досліджували на основі кількісного вивчення основних популяцій та субпопуляцій лімфоцитів (СД3+, СД4+, СД8+, СД16+, СД20+) з використанням комерційних наборів виробництва фірми "Сорбент" (м. Москва), що містили моноклональні антитіла до поверхневих антигенів лімфоцитів. Міжпопуляційні взаємозв'язки лімфоцитів ми оцінювали на основі вивчення вмісту в плазмі крові дітей основної та контрольної груп інтерлейкіну-2 та інтерлейкіну-4 за допомогою комерційних наборів " РroCon IL-2" і " РroCon IL-4" виробництва ООО " Протеиновый контур", Росія.
Вміст імуноглобулінів класів А, М, G в плазмі крові новонароджених вивчали за стандартною методикою радіальної імунодифузії в агарі, з використанням антисироватки до відповідних імуноглобулінів, виробництва фірми "Коhе" (Фінляндія). Калібровочну криву викреслювали за даними, отриманими при використанні сироватки з означеною кількістю імуноглобулинів класів А, М, G, виробництва фірми "Коhе" (Фінляндія). Рівень загального імуноголобуліну Е визначали імуноферментним методом з використанням комерційного набору виробництва 000 " Полигност", Росія.
Стан фагоцитозу (фагоцитарний індекс, фагоцитарне число, показник завершення фагоцитозу) вивчали з використанням в якості субстрату фагоцитозу дріжджевих грибів.
Вміст в плазмі крові С3 і С4 фракцій комплементу досліджували за допомогою колориметричного методу з використанням комерційних наборів виробництва фірми "Sigma-diagnostics" (Австрія).
Рівень циркулюючих імунних комплексів виявляли методом преципітації в поліетиленгликолі. Визначення вмісту лізоцима в плазмі крові проводили нефелометричним методом.
2.4. Методи оцінки функціонального стану клітинних мембран.
Активність креатинкінази в плазмі крові і лікворі визначали за допомогою колориметричного методу з використанням комерційного набору виробництва фірми "Sigma-diagnostics" (Австрія). Рівень дієнових кон'югат визначався спектрофотометрично, малонового діальдегіду з використанням тіобарбітурової кислоти. Загальна антиокисна активність плазми крові (ЗАОА) визначали за методом J. Stocks у модифікації Спектор Е.Б. із співавт. [110].
Кислотну стійкість еритроцитів ми вивчали за характером кислотних еритрограм, згідно рекомендаціям Гительзона І.І. і Черскова О.П. [111]. Для визначення осмотичної стійкості лімфоцитів нами була використана методика, запропонована В.М. Компанійцем [73].
Математично-статистична обробка результатів дослідження проводилася з використанням параметричних методів варіаційної статистики і включала проведення кореляційного, факторного і дискримінантного аналізів на ПЕВМ "Pentium-1", з використанням стандартних програм для обчислення результатів "Microsoft Exсel". Параметрична оцінка проводилася за Т-критерієм Ст'юдента. Різниці при порівнянні величин вважали вірогідними при р <0,05.