2
ОГЛАВЛЕНИЕ
1 ВВЕДЕНИЕ........................................................4
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ................................................8
2.1.Определение колибактериоза, морфологические,
культуральные, биохимические, антигенные свойства E. coli.....8
2.2. Факторы патогенности.....................................10
2.2.1. Энтеротоксигенные E. coli..............................10
2.2.2. Энтеропатогснные E. coli...............................14
2.2.3. Энтсроинвазивные E. coli...............................14
2.2.4. Септические E. coli....................................14
2.3. Лабораторная диагностика колибактериоза..................15
2.3.1. Бактериологические методы выделения
и идентификации E. coli.......................................15
2.3.2. Диагностические тесты, используемые для
диагностики колибактериоза....................................21
2.4. Принципы приготовления эритроцитарных
антигенных диагностикумов.....................................37
3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.......................................52
3.1. Материалы и методы.......................................52
3.1.1. Выделение возбудителей острых кишечных заболеваний и оценка их культурально-морфологических
и биохимических свойств.......................................52
3.1.2. Приготовление эшерихиозного антигенного эритроцитарного диагноста кума........................... 55
3.1.3. Получение гипериммунных сывороток......................56
3.1.4. Получение сывороток КРС................................56
3.1.5. Постановка РНГА микрометодом...........................57
3.1.6. Постановка РНГ’А макрометодом..........................58
3.1.7. Постановка реакции агглютинации........................59
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.....................................60
4.1. Клинико-эпизоотологические данные........................60
4.2. Серологическая и биохимическая идентификация E. coli 63
з
4.3. Методика приготовления эшерихиозного
антигенного эригроцитарного диагностикума...................65
4.3.1. Подготовка эритроцитарной массы......................66
4.3.2. Подготовка гемосенситинов............................72
4.3.3. Сенсибилизация эритроцитов...........................73
4.4. Контроль качества эритроцитарных диагностикумов........75
4.4.1. Прозрачность и цветность.............................75
4.4.2. Контроль на спонтанную агглютинацию..................76
4.4.3. Специфичность и активность...........................76
4.5. Результаты экспериментальных испытаний эритроцитарного диагностикума в РНГ А на
материале от вакцинированных животных.......................84
4.6. Результаты изучения чувствительности
РИГА и РА...................................................89
4.6.1 .Результаты сравнительного изучения РИГА
макро- и микрометодом.......................................89
4.6.2. Результаты сравнительного изучения РИГА
макрометодом и РА...........................................90
5 ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ............................92
6 ВЫВОДЫ......................................................100
7 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ....................................101
8 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ............................102
9 ПРИЛОЖЕНИЕ..................................................121
12
Антигены адгезии. В 1950 г. A.L. Houwink и W. V. Iterson впервые обнаружили нежгутиковые филаменты у изолятов E. coli, представляющие собой тонкие нитевидные образования на поверхности бактериальной клетки - адгезивные фимбрии, или пили (Соколова H.A. с соавт., 1989; Зароза В.Г., 1991, 1995). Они обнаружены у многих бактерий семейства Entcrobacteriaccac.
Антигены адгезии - специальные белковые образования, выполняющие функцию распознавания чувствительных к ним клеток макроорганизма и прикрепления к ним (Езепчук Ю.В., 1985, Зароза В.Г., 1991, 1995). У штаммов E. coli они входят в состав фимбрий, радиально отходящих от поверхности бактери&зьных клеток.
В настоящее время на основе реакции адгезивной гемагглютинации выделяют две разновидности адгезивных фимбрии E. coli: маннозочувствитсльные фимбрии или фимбрии 1-го типа (синонимы: общие фимбрии, неспецифические адгезины).
Наряду с маннозочувствительными у E. coli обнаружены маннозоустойчивые адгезивные фимбрии (синоним: специфические
антигены адгезии).
Фимбрии 1-го типа (F1) обнаружены почти у всех бактерий семейства Enterobacteriaceae. С помощью них бактерии могут осуществлять функцию прикрепления к субстрату - адгезию, а также образовывать пленку на поверхности жидкой питательной среды при выращивании на ней бактерий в статическом состоянии. У изолятов E. coli фимбрии l-ro типа представлены белковыми образованиями, радиально отходящими от поверхности наружной мембраны бактериальной клетки и как бы окаймляющими ее бахромкой. Фимбрии 1-го типа являются одним из патогенных факторов энтеротоксигенных E. coli.
13
У энтеротокси генных изолятов E. coli - возбудителей эшерихиоза у животных - известны следующие специфические антигены адгезии: К99, К88, 987Р, F41 и др.
Антиген адгезии К99. Изоляты E. coli К99 обладают выраженной специфичностью к агглютинации эритроцитов лошади, слабо агглютинируют эритроциты овцы и человека и не агглютинируют эритроциты морской свинки. Такие изоляты E. coli чаще всего адгезируются на клетках слизистой оболочки тонкого кишечника телят, поросят, ягнят (Малахов Ю.А. с соавт., 1993; Головко A.H., 1997).
Прикрепление E. coli с К99 к эпителиальным клеткам кишечника животных не сдерживается наличием у бактерий фимбрий К88, 987Р и 1-го типа. Для изолятов E. coli с К99 характерна повышенная устойчивость к терапевтическим средствам (Кондакова И.А., 2000).
Антиген адгезии К99 встречается у большинства энтеротоксигенных E. coli, выделенных при желудочно-кишечных заболеваниях новорожденных телят (Малахов Ю.А. с соавт., 1993). Энтеротоксигенные E. coli с этим адгезином, но реже вызывают эшерихиоз также у поросят, ягнят, козлят и жеребят (Р. Guinee, 1977; О. А. Полякова и соавторы, 1986; D.R. Snograss, 1986).
Антиген адгезии К88 (F4). В 1961 г. антиген адгезии К88 был описан как капсульный К88, позже установлено, что он имеет структуру, сходную с другими адгезивными антигенами, и иірает важную роль у энтеротоксигенных E. coli, населяющих кишечник новорожденных поросят (W. Gaastra, F. de Graaf, 1982; J. A. Morris et al., 1983; Малахов Ю.А. с соавт., 1993; Головко А.Н., 1997).
- Київ+380960830922