Разработка ассоциированной вакцины против лептоспироза и кампилобактериоза крупного рогатого скота

2
СОДЕРЖАНИЕ
Стр.
ВВЕДЕНИЕ 4
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8
1.1. ЛЕПТОСПИРОЗ 8
Морфология лептоспир 10
Культуральные свойства лептоспир 13
Антигенные свойства лептоспир 15
Распространенность и этиологическая структура лептоспироза 16 Специфическая профилактика лептоспироза 24
1.2. КАМПИЛОБАКТЕРИОЗ 29
Морфологические свойства кампилобактерий 30
Культуральные свойства кампилобактерий ^ *
Антигенная структура кампилобактерий 34
Распространенность кампилобактериоза 36
Специфическая профилактика кампилобактериоза 39
1.3. АССОЦИИРОВАННЫЕ ВАКЦИНЫ 46
АНАЛИЗ ДАННЫХ ЛИТЕРАТУРНОГО ОБЗОРА 51
Глава 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 54
2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 54
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 69
2.2.1. ЭТИОЛОГИЧЕСКАЯ СТРУКТУРА ЛЕПТОСПИРОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА 69
2.2.2. ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ 75 ШТАММОВ ЛЕПТОСПИР И КАМПИЛОБАКТЕРИЙ
Работа с производственными штаммами лептоспир 75
Работа со штаммами кампилобактерий 80
2.2.3. РАЗРАБОТКА И ИСПЫТАНИЕ АССОЦИИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗА И КАМПИЛОБАКТЕРИОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА 84
3
Изучение зависимости антигенной активности лептоспир от метода и степени концентрирования 84
Получение концентрированной бактериальной массы кампилобактерий 89
Определение оптимального количества кампилобактерий, вызывающего полный иммунный ответ у кролика 91
Подбор оптимальных соотношений лептоспир и
кампилобактерий 93
2.2.4. ИЗГОТОВЛЕНИЕ АССОЦИИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗА И КАМПИЛО-БАКТЕРИОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА 95
Изготовление лептоспирозного антигена 95
Изготовление кампилобактериозного антигена 98
Изготовление и контроль ассоциированного препарата 98
Изучение напряженности и продолжительности иммунитета у крупного рогатого скота, вакцинированного ассоциированной вакциной 102
Определение режима и сроков хранения ассоциированного препарата 117
2.3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 120
3. ВЫВОДЫ 126
4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 128
5. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 129
ПРИЛОЖЕНИЕ 155
►
15
которых определили как 11-форму, а лептоспиры из точечных колоний, занимающие промежуточное положение, - как переходную О-форму. Изменение формы колоний у лептоспир идет от Б- к О- и далее к 11-форме. Клоны из колоний различной формы довольно стабильны и сохраняются при ряде последующих пересевов. Культуральная изменчивость лептоспир сопровождается значительным изменением антигенных, иммуногенных и вирулентных свойств (Ю.А. Малахов, Г.Л. Соболева, 1981).
Результаты этих исследований позволили авторам рекомендовать следующий порядок селекции штаммов лептоспир для изготовления биологических препаратов, применяемых при лептоспирозе.
Прежде всего, для производственных целей следует отбирать вирулентные штаммы, у которых необходимо изучать характер роста на плотной питательной среде и в случае необходимости проводить клонирование для получения культур с однородными (однотипными) дисковидными колониями. Из вирулентных штаммов лептоспир с колониями дисковидной формы следует отбирать наиболее активные в антигенном и иммуногенном отношении путем оценки их по антигенной активности на кроликах и иммуногенной - на золотистых хомячках.
Антигенные свойства лептоспир
Антигенная и иммуногенная активность лептоспир сравнительно легко может изменяться в зависимости от состава среды, в которой выращивается культура. В среде с бычьим альбумином антигенная активность лептоспир снижается. Антигенность и агглютинабельность таких культур, ниже по сравнению с исходными культурами, выращенными в сывороточной питательной среде (БшШет, 1964, 1966; Т.П. Адуева, 1971). Если вирулентный штамм культивировался в синтетической среде, содержащей ограниченное количество твина-80, то клетки лептоспир обладали слабой агглютинабельностью и агглютиногенностью. При этом они не полностью абсорбировали гомоло-
16
гичные агглютинины. После ряда пассажей в полноценной питательной среде агглютинабельность и агглютиногенность полностью восстанавливалась, однако штамм полностью утрачивал вирулентность.
Ю.А. Малахов, А.П. Самохвалов, B.C. Соловьева (1973), А.П.Самох-валов (1977) установили, что антигенные и иммуногенные свойства производственных штаммов лептоспир значительно снижаются при выращивании на питательной среде с овечьим альбумином и фактором роста (среда ГНКИ), соответственно снижается иммуногенная и антигенная активность изготовленного из них препарата.
Антигенные свойства лептоспир также значительно меняются при культивировании лептоспир с сывороткой, содержащей, антитела гомологичные выращиваемому штамму, соответственно снижается антигенная и иммуногенная активность изготовленного из них препарата (Г.Л. Соболева, 1980).
Приведенные материалы свидетельствуют, что лептоспиры весьма чувствительны к воздействию среды обитания, довольно быстро изменяют в количественном отношении антигенную и иммуногенную активность под воздействием неблагоприятных факторов.
Распространенность и этиологическая структура лептоспнроза
Патогенные лептоспиры распространены в мире очень широко. По материалам Секретариата ФАО лептоспироз крупного рогатого скота зарегистрирован на всех континентах и практически во всех странах, где проводились исследования. Распространенность лептоспироза наиболее полно изучена в Европе и Северной Америке. Вместе с тем, огромные территории в Африке, Южной Америке и, частично, в Австралии все еще остаются белыми пятнами с точки зрения их эпизоотической ситуации по лептоспирозу (Ю.А. Малахов, А.Н. Панин, Г.Л. Соболева, 2001).
Знание распространенности и этиологической структуры лептоспироза, т.е. перечня сероваров лептоспир, поражающих сельскохозяйственных и ди-