Факторы персистенции микрофлоры при маститах коров

2
СОДЕРЖА Н И Е
ВВЕДЕНИЕ............................................................5
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.........................................10
1.1. Факторы персистенции условно-патогенных микроорганизмов и их роль при маститах у коров....................................10
1.2. Препараты-пробиотики и свойства входящих в их состав бацилл 18
1.3. Регуляция персистентных свойств микроорганизмов пробиотиками..25 Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ..........................28
2.1. Характеристика материала и методы определения биологических свойств микрофлоры, выделенной из молока.....................28
2.2. Методики изучения патогенных и персистентных свойств выделенных микроорганизмов..........................................29
2.3. Методики определения антагонистической активности пробиотиков и влияния пробиотиков на факторы персистенции микроорганизмов 31
2.4. Методика клинического испытания эффективности споробактерипа при разных формах мастита коров..............................34
2.5. Методы статистической обработки материала..................35
Глава 3. БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МИКРОФЛОРЫ, ВЫДЕЛЕННОЙ ИЗ МОЛОКА И ВОЗМОЖНОСТЬ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ДЛЯ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАЗВИТИЯ И ДИАГНОСТИКИ МАСТИТА У КОРОВ.............................................................38
3.1. Характеристика видового состава и биологических характеристик микроорганизмов, выделенных из молока здоровых и больных маститом коров....................................................38
3.2. Использование факторов персистенции стафилококков для прогнозирования возникновения мастита................................46
3.3. Способ диагностики субклинической формы мастита микробной этиологии у коров...................................................55
3
Глава 4. РЕГУЛЯЦИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МИКРОФЛОРЫ ПРОБИОТИКАМИ НА ОСНОВЕ СПОРООБРАЗУЮЩИХ МИКРООРГА-ГАНИЗМОВ IN VITRO.......................................62
4.1. Изучение антагонистической активности производственных штаммов, входящих в состав пробиотиков в отношении основных возбудителей мастита коров......................................61
4.2. Динамика персистентных свойств микроорганизмов под влиянием пробиотиков на основе спорообразующих микроорганизмов.64
Глава 5. РАЗРАБОТКА НОВЫХ ПОДХОДОВ К ЛЕЧЕНИЮ МАСТИТОВ
У КОРОВ.................................................80
ЗАКЛЮЧЕНИЕ..............................................97
ВЫВОДЫ.................................................107
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ................109
УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ....................................110
ПРИЛОЖЕНИЕ.............................................134
12
нальных фагоцитов. Передача плазмиды с геном, кодирующим синтез антили-зоцимного фактора, обеспечивала микроорганизму-реципиенту устойчивость к переваривающему действию макрофагов [Петровская В.Г., Маракуша Б.И.,
1987]. Бактерии, обладающие АЛА, лучше выживали внутри нейтрофилов по сравнению с неактивными штаммами [Усвяцов Б.Я. с соавт., 1990]. Клиническая значимость АЛА прослежена на обширном фактическом материале. Так, например, с увеличением уровня АЛА микроорганизмов нарастала выраженность основных клинических симптомов, характеризующих тяжесть инфекции, затягивался процесс выздоровления, формировалось реконвалесцентное носи-тельство. Параллели между тяжестью и длительностью инфекционного процесса, с одной стороны, и АЛА микроорганизмов - с другой, прослежены при гинекологических заболеваниях [Первушина Л.А., 1990], пиелонефрите [Зыкова Л.С., 1986], травмах и фурункулах [Сафронов A.A., Желтова В.И., 1990].
Изучено взаимоотношение биологических свойств возбудителя мастита у коров с содержанием лизоцима в секрете вымени при разных формах заболевания и у здоровых животных. Анализ распространения и выраженности лизо-цимной и антилизоцимной активностей у микроорганизмов, выделенных из молока больных животных, установил преобладание лизоцимпродуцирующих штаммов при клинической форме заболевания и доминирование АЛА признака у штаммов, выделенных при субклинической форме мастита. Выявлена обратная зависимость между уровнем антилизоцимной активности патогена и содержанием лизоцима в молоке больных животных [Чернова О.Л., 2001].
Среди прочих факторов системы естественной противоинфекционной резистентности важное значение придается также взаимодействию микроорганизмов с интерфероном (интерферонами), что объясняется выраженной ролью последних в патогенезе стафилококковой инфекции [Смирнов В.В., Вершигора
А.Е., 1988]. В частности, а/b интерферон повышает функциональную активность фагоцитов [Вихоть Н.Е.с соавт., 1989] и устойчивость эукариотических клеток к токсинам стафилококков [Бабаянц A.A., Кагранова Г.Г., 1984]. Интер-
13
ферон также ингибирует пролиферацию Т-лимфоцитов после их стимуляции суперантигенами стафилококков через подавление продукции интерлейкина-2 и угнетение экспрессии 1Ь-2рецепторов [Soos J.M., Jonson Н.М., 1995]. Сообщения ряда авторов [Печеркина С.А.с соавт., 1979; 1982] об обнаружении феномена антистафилококкового (бактерицидного и бактериостатического) действия препаратов человеческого лейкоцитарного интерферона послужили толчком для обнаружения способности к подавлению антибактериального действия препарата интерферона, обозначаемой автором как «антиинтерфероно-вая» активность [Соколов ВЛО., 1990].
Результаты, полученные на разных группах микроорганизмов, показали, что «антиинтерфероновый» фактор подавляет катионные белки фагоцитов, обладает цитотоксическим эффектом, утяжеляя течение инфекции в клинике, а его мишенью является бактерицидный фрагмент препарата лейкоцитарного интерферона [ Сурикова Е.В., 1992; Рищук С.В., 1993].
В результате выделения и очистки антимикробного фактора из препарата человеческого лейкоцитарного интерферона был получен термостабильный протеин с молекулярной массой 11,0-11,5 kDa и изоэлектрической точкой 10,5-11,0, оказывающий бактерицидное действие на грамположительные микроорганизмы в концентрации от 0,05 до 1 мкг/мл [Бухарин О.В., 1994]. По совокупности своих свойств он схож с катионными белками, что объясняет его присутствие в препарате альфа-интерферона, получаемого при индукции нейтрофиль-ных лейкоцитов.
Одним из ведущих факторов естественной противоинфскционной резистентности макроорганизма является тромбоцитарный катионный белок (ТБК), играющий ключевую роль в уничтожении микроорганизмов с преимущественно внеклеточным типом паразитирования. Известно бактерицидное действие ТКБ в отношении различных микроорганизмов, преимущественно, грамполо-жительной группы [Бухарин О.В., Васильев Ы.В., 1974; Бухарин О.В., Сулейманов К.Г.,1997], что характеризует описываемый пептид как фактор неспеци-