РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Экспериментальное исследование
В экспериментах на 70 кроликах изучен прецизионный двух- и трехрядный шов на различных уровнях желудочно-кишечного тракта. В таблице 2.1 представлено распределение экспериментального материала по сериям опытов а также по срокам патогистологических исследований.
Экспериментальные исследования выполнены на кафедре нормальной анатомии человека и на базе ЦНИЛ Крымского государственного медицинского университета. Морфологические исследования проведены на базе кафедры патологической анатомии КГМУ (зав. кафедрой- профессор А.К. Загорулько)
Таблица 2.1
К-во опытов и
сроки п\г исс.
Серии опытовКол-во
опытовСроки патогистологических исследований (в сутках)1-35-6143060всегоГастро-энтероанастомоз
(3- ряд. прец. шов)102232110Толсто-толстокишечный анастомоз
(3- ряд. прец. шов)253465725Тонко-тонкокишечный анастомоз (2- ряд. прец. шов).252548625Тонко-тонкокишечный анастомоз (контрольная группа. Шов Альберта-Шмидена).104122110количество измерений70111215171570Распределение экспериментального материала по сериям и срокам
Примечание: Все кролики - самцы, приблизительно одного веса и
возраста.
Кролики содержались в стандартных условиях в виварии, оперативные вмешательства проводились с использованием общего (калипсолового) наркоза. Эксперимент соответствовал требованиям биоэтики, животные не подлежали острому эксперименту.
В основу эксперимента поставлена цель обеспечения с помощью прецизионной техники идеального сопоставления слоев анастомозируемых органов, а также - минимальной воспалительной реакции в тканях и биологической герметичности соустий.
Все операции выполнены с помощью микрохирургической техники, атравматических игл и биосовместимых шовных материалов (пролен, викрил 5.0-6.0), увеличительной оптики, обеспечивающей увеличения в 4-6 раз, (операционная лупа, нейрохирургический налобный рефлектор со сменными увеличительными линзами), микрохирургического инструментария. Длительность наложения анастомозов колебалась от 30 до 40 минут.
2.1.1. Методика 3- рядного прецизионного шва. Слизистая оболочка желудка и кишки циркулярно сшивалась непрерывным швом рассасывающимся викрилом (5.0-6.0) на атравматической игле. (рис. 2.1).
А Б
Рис. 2.1. Методика трехрядного прецизионного шва. А - шов слизистой оболочки; Б - шов подслизистого слоя.
Затем отдельными узловыми швами с использованием полипропиленовой нити (5.0-6.0) сопоставляется подслизистый слой. Расстояние между швами составляет 5-6 мм (рис. 2.1-Б). Серозно-мышечный ряд швов также создается с интервалом 5-6 мм, но таким образом, чтобы он не совпал со швом подслизистого слоя (в шахматном порядке) (рис. 2.2).
Рис. 2.2. Наложение проколов швов в шахматном порядке.
Рис.2.3. Трехрядный прецизионный шов. А- слизистый слой, Б - подслизистый слой, С - мышечный слой, D - серозный слой.
2.1.2. Методика 2- рядного прецизионного шва. Декларационный патент № 8040 от 15.07.05, UA 7 МПК A61B17/00. Спосіб формування анастомозу на товстій кишці. / Велигоцкий Н.Н., Жебровський В.В., Аль-Ола Мухамед М.А. КДМУ - заявка № u 200500077 .- Заявл 00.00.2005.- Опубл.00.07.2005.- Бюл. № 10.- 2 с.
Идея данного метода принадлежит лауреату Государственной премии Украины, профессору Н.Н. Велигоцкому.
Швом типа Донати сопоставляются "встык", слизистый и подслизистый слои анастомозируемых органов (рис. 2.4).
Для этих целей применяли викрил (5.0) на атравматической игле. Вторым рядом швов, сохраняя принцип отсутствия единого сквозного прокольного канала, сшивается серозно-мышечный слой проленовой нитью (5.0).
Рис. 2.4. Методика двухрядного прецизионного шва. А- слизистый слой, Б- подслизистый слой, С- мышечный слой, D- серозный слой.
2.1.3. Методика гистологических исследований. Из кусочков тканей анастомозов изготавливали парафиновые срезы толщиной 8-10 микрометров и производили их окраску различными способами. Так, для оценки воспалительной реакции в тканях срезы окрашивали гемотоксилин-эозином, по ван-Гизон, по Маллори.
Эти же окраски, дополненные импрегнацией по Гомори, применили для изучения процессов заживления анастомозов. Феномен проницаемости анастомозов для микрофлоры изучали с помощью окраски по Граму-Вейгерту, а также с помощью бактериологического исследования смывов с зоны анастомозов.
2.1.4. Методика определения биологической герметичности тонко-тонкокишечных анастомозов. Опыты произведены на 24 кроликах опытной серии и животных группы сравнения.
Смывы с зоны анастомоза производили в условиях хронического опыта в асептических условиях через 6-12 часов, 24-48 и 72 часов после операции. Весь период эксперимента животное фиксировали на операционном столе. Всего произведено 72 смыва с зоны анастомозов.
Смывы производили через полихлорвиниловый дренаж диаметром 1 мм, подведенный к зоне прецизионного шва и фиксированный к кишечной стенке тончайшим атравматичным швом (6,0). Содержимое брюшной полости для идентификации вносили в колбы с сахарным мясо-пептонным бульоном (СМПБ). Далее материалы термостатировали при 37°C в течение суток в условиях аэрирования. С сахарного мясо-пептонного бульона материалы пересевали на кровяной агар. Посевы инкубировали при 37°C 24 часа и 48 часов на среде Сабуро. Учитывали результаты посевов.
Для определения количества микробных тел в 1 мл смыва, взятого из брюшной полости, полученный материал смешивали со стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:10. Затем стерильной пипеткой из полученного раствора брали 0,3 мл жидкости. В чашку Петри добавляли 0,2 мл раствора , а остаток (0,1 мл) смешивали с 0,9 мл физиологического раствора и получили разведение 1:100. Таким же образом готовили последующие десятикратные разведения, которые в количестве 0,2 мл заливали в чашки Петри с питательной средой на 1000 мл воды - 20 г агар-агара,