РОЗДІЛ 2
Об’єкти І методи досліджень
2.1.Об’єкти досліджень
Об’єктами досліджень були виробничі штами мікроорганізмів і біопрепарати на їх
основі: азотфіксуючий штам Agrobacterium radiobacter 204 (препарат діазофіт),
фосфатмобілізуючий штам Enterobacter nimipressuralis 32-3 (препарат ФМБ 32-3)
та антифунгальний штам Paenibacillus polymyxa 6M (препарат БСП). А також
штам-антагоніст фітопатогенних грибів Chaetomium cochliodes Palliser 3250 і
хетомік – торф’яний препарат на його основі любязно надані нам його автором
С.П. Надкерничним, завідувачем лабораторії біометоду Інституту
сільськогосподарської мікробіології УААН, якому ми висловлюємо щиру вдячність.
Об’єктами досліджень були районовані в зоні Лісостепу України пшениця яра сорту
Колективна 3, ячмінь ярий сорту Цезар, озима пшениця сорту Миронівська 61.
Х а р а к т е р и с т и к а м і к р о о р г а н і з м і в - о б’ є к т і в д о
с л і -д ж е н ь. Paenibacillus polymyxа 6М. Клітини мають паличковидну форму
(Рис. 2.1.) і рухомі у фазу експоненційного росту культури за рахунок
перитрихіального розташування джгутиків. Розмір клітин 0,5 – 0,7 ґ 3 – 5 мкм.
Ендогенна спора еліптичної форми, центрально-термінального розташування в чітко
роздутому спорангії. У рідкому кукурудзяно-мелясовому середовищі спори
утворюються на третю добу, в МПБ – вже на другу, в гороховому середовищі – на 4
– 6-ту добу. Фарбування за Грамом дає позитивну реакцію.
Наростання біомаси і спороутворення бактерій на гороховому агарі з вуглеводами
інтенсивне, штрих блискучий, слизький, з гладкою поверхнею. Колонії на
гороховому агарі без вуглеводів мають випуклу округлу форму з бугристою
поверхнею до 4 мм в діаметрі. Біомаса дуже в’язка. На середовищах з органічним
азотом (МПА) штам утворює плоскі, неблискучі, пастоподібні колонії з бідною
біомасою, без утворення слизу, але з активною споруляцією. Культура росте на
безазотних мінеральних середовищах з утворенням великої кількості
полісахаридів, але спор також не утворює.
Рис.2.1. Морфологія клітин штаму Paenibacillus polymyxа 6М
За відношенням до кисню – факультативний анаероб, росте на аеробному агарі в
анаеробних і аеробних умовах.
На перших етапах розвитку культури у рідких середовищах з вуглеводами утворює
кислоту, але на послідуючих етапах розвитку культури, при уповільненні росту
після експоненціальної фази, культуральна рідина набуває лужних значень рН.
Enterobacter nimipressuralis 32-3. Клітини мають паличковидну форму, рухливі,
неспорові. Забарвлення по Граму - негативне. В амінопептидному бульйоні ріст
спостерігається у вигляді рівномірного помутніння, клітини мають форму прямих,
коротких паличок з округлими кінцями. Довжина клітини становить 1,6 мкм, ширина
– 0,9 мкм (рис 2.2.).
Рис.2.2. Морфологія клітин штаму Enterobacter nimipressuralis 32-3
На гліцериново-пептонному агарі культура утворює дрібні (1,5 – 2 мм), круглі,
випуклі, блискучі, непрозорі колонії жовтувато-білого кольору з рівними краями.
На картопляному косяку спостерігається помірний ріст з утворенням незначної
кількості слизу. Забарвлення штриха – білувате, картопляний косяк злегка буріє.
На середовищі Кінга пігменти не утворюються, колір штриха не змінюється. На
середовищі з органічним джерелом азоту (м`ясо-пентонний агар) ріст добрий; на
синтетичних середовищах з мінеральним джерелом азоту– ріст менш інтенсивний.
Нітрати відновлює до нітритів – яскрава проява ознаки: середовище Гільтая (з
бром-тимоловим синім ) набуває синього кольору; реакція з реактивом Гріса –
позитивна, відмічається рожевий колір середовища; газоутворення не відмічено.
При використанні вуглеводів (на середовищі Козера з бром-тимоловим синім)
відмічено слідуючу реакцію: сахарозу, глюкозу, рамнозу використовує з
підкисленням середовища і утворенням бульбашок газу в товщі агару.
Agrobacterium radiobacter 204. Клітини штаму паличковидні, розміром,
відповідно, 0,7-0,8 х 2,6-3,2 мкм. Грамнегативні і спор не утворюють.
На МПА і гороховому агарі культура штаму утворює полісахаридний слиз. Колонії
за морфологією: напівпрозорі, безколірні, гладкі і з рівним краєм, діаметр до
1,2 см. На безазотних середовищах розмір колоній рідко перевищує 4 мм.
Зброджує прості вуглеводи з підкисленням середовища і виділенням газу. При
рості на МПА утворює лужні продукти метаболізму.
Рис. 2.3. Морфологія Agrobacterium radiobacter в однодобовій культурі
(х18000)
Засвоює мінеральні і органічні форми азоту. При рості в безазотних середовищах
фіксує молекулярний азот.
Chaetomium cochliodes Palliser 3250. Мікроміцет має плодові тіла округлої,
овальної форми, 270-370 х 200-310 мкм, що мають оливково-зелене до
оливково-коричневого забарвлення, з відростками, в нижній частині з ризоідами.
Верхівкові відростки двох типів: прямі внизу, з 3-5 вільними завитками вгорі,
товщиною 5-6 мкм, шороховаті, темно-коричневі; світло-жовто-коричневі з 3-
завитками, товщиною 3-3,5 мкм. Бокові відростки прямі, дещо хвилясті, 5 µ
товщиною, біля основи мають перегородки, слабкошорсткі, темно-коричневі,
світлішають до верхівки. Сумки булавовидні, восьмиспорові. Сумкоспори овальні
до лимоновидних, з загостреними кінцями, 8-10 х 7-8 мкм, забарвлення від
оливково-зеленого до оливково-коричневого.
Рис. 2.4. Морфологія Chaetomium cochliodes Palliser 3250
2.2. Методи досліджень
М і к р о б і о л о г і ч н і м е т о д и д о с л і д ж е н ь. Всі
мікробіологічні аналізи, тобто техніку відбору зразків ґрунту, насіння,
поверхні рослинних тканин, виготовлення послідовних розведень мікробних
суспензій в фізіологічному розчині і посіви їх на агаризовані поживні
середовища, здійснювали загальноприйнятими методами [9,53].
- Киев+380960830922