ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Материалом исследования послужил головной мозг 216 экспериментальных животных ?
беспородные белые крысы-самцы. В целом результаты работы базировались на
изучении 1728 объектов (миндалевидное тело).
Выбор объекта экспериментального исследования обусловлен тем, что относительно
короткий жизненный цикл крыс позволяет экспериментально исследовать действие
изучаемых препаратов на особях разного возраста, что в случае с другими
лабораторными животными было бы весьма затруднительно. В эксперименте были
задействованы только самцы, с целью избежать некорректности в постановке
эксперимента, обусловленной наличием у самок циклических гормональных влияний.
Дополнительным фактором в пользу выбора крыс в качестве экспериментального
объекта послужило и то, что крыса является одним из основных объектов
исследования при изучении памяти, способности к обучению, пищевых, половых и
других поведенческих реакций, в регуляции которых принимают участие исследуемые
нами структуры. Небольшие линейные размеры исследуемого материала (головной
мозг крыс) дали возможность исследовать ядра и основные части (отделы)
миндалевидного тела (МТ) на фронтальных срезах всего головного мозга и тем
самым определить топографические отношения исследуемых структур и окружающих их
образований.
Экспериментальная часть исследования выполнена на 168 белых беспородных крысах
самцах 2-х возрастных групп (неполовозрелые и репродуктивного возраста). В
соответствии со схемой возрастной периодизации И.П. Западнюка и соавт. [67]
отбирались животные неполовозрелые и периода полового созревания (самцы 1 и 5
месяцев от рождения): неполовозрелый возраст (m = 50-60 гр.) и молодой возраст
репродуктивного периода (m = 180-200 гр.) Кроме того, исследовался материал от
48 контрольных (вводилась плацебо) животных.
Экспериментальной моделью служил процесс длительного внутрижелудочного введения
животным водной суспензии барбитуратов (фенобарбитона и бензонала) с
последующей коррекцией влияния последних силибором, который вводился также
внутрижелудочно в виде водной суспензии. Вышеуказанные препараты использовались
в среднетерапевтической дозе применяемой в противосудорожной терапии [25, 137,
150]. Животным контрольных подгрупп вводили такой же объем дистиллированной
воды.
Выбор использованных в работе барбитуратов не случаен: фенобарбитон – наиболее
широко и длительно применяемый в клинической практике препарат этой группы
лекарственных средств [25, 189]. Что касается бензонала, то в последнее время
проводится изучение преимуществ и недостатков (по терапевтической эффективности
и выраженности побочных действий) этого препарата в сравнении с фенобарбиталом
[136, 152, 153, 168]. В качестве корректора предполагаемых морфологических
изменений МТ головного мозга при хроническом использовании вышеуказанных
барбитуратов был выбран отечественный препарат силибор, обладающий
гепатопротекторным и детоксикационным действием. Обоснованием к применению
данного препарата послужила его способность изменять метаболизм клеток при
продолжительном действии барбитуратов, а также снижать количество щелочной
фосфотазы, повышение уровня которой наблюдается при применении фенобарбитона
[57].
В работе применяли фенобарбитон в таблетированной лекарственной форме
производства: «Elegant India», бензонал казанского производственного
химико-фармацевтического объединения «Татхимфармпрепараты» и силибор
харьковской фармацевтической фирмы «Здоровье». Все медикаменты приобретены на
Луганском областном коммунально-производственном предприятии «Фармация».
Животные обеих исследуемых возрастных групп были разделены на серии в
зависимости от вида и дозы вводимого препарата. Так, в сериях «Ф1» и «Ф2»
представлены животные, получавшие фенобарбитон в дозах 30 и 70 мг/кг
соответственно [137, 150]. Среди неполовозрелых крыс выделена серия животных
«Б», которым вводили 35 мг/кг бензонала [48, 49, 137]. Контролем «К» для этих
серий служили животные, получавшие дистиллированную воду из расчета 10 мл/кг.
Серию «С» составили животные, которые на фоне введения 30 мг/кг фенобарбитона
получали силибор в дозе 80 мг/кг, как корректор [137].
Все препараты вводились ежедневно в одно и тоже время в виде суспензии на
дистиллированной воде при помощи металлического желудочного зонда.
Постановка эксперимента осуществлялась в соответствии с Правилами проведения
работ с экспериментальными животными [67]. Опыты проводились и с учетом «Правил
доклинической оценки безопасности фармакологических средств (GLP)» [129].
Эксперимент проводился в осенне-зимний период года. Все животные содержались в
стандартных условиях вивария, находились на стандартном рационе, в одинаковых
условиях содержания и питания. В ходе эксперимента проводились наблюдения за
динамикой массы тела подопытных животных каждые 10 дней. При ежедневном
наблюдении за общим состоянием и поведением животных отклонений не выявлено.
С целью изучения длительного влияния барбитуратов на морфологию МТ головного
мозга крыс исследования нервной ткани проводились на 7, 15, 30 и 60 сутки после
начала введения препаратов.
Таким образом, экспериментальные животные в работе распределялись по возрасту,
сериям и срокам эксперимента (табл. 2.1).
Умерщвление животных производилось путем декапитации под эфирным наркозом с
соблюдением основных требований к эвтаназии, изложенных в «Методических
рекомендациях по выведению лабораторных животных из эксперимента» [99]. Для
аккуратного и щадящего извлечения головного мозга мелких животных автором было
предложено «Устройство для фиксации головы лабораторного животного (крыс
- Киев+380960830922