ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Нами проведено изучение морфологических особенностей слизистой оболочки желудка крыс в условиях введения золедроновой кислоты в чистом виде, а также в комбинации с гидрокортизоном.
Данное экспериментальное исследование было проведено на 230 беспородных белых крысах-самцах, которые находились в условиях вивария Луганского государственного медицинского университета. Эксперимент проводили в осенне-зимний период. Во время эксперимента крысы находились в помещении вивария при температуре 20-220С, влажности около 50%, в пластиковых клетках по 6 особей в каждой. Вскармливание животных проводили согласно с нормами института питания АМН Украины, предназначенного для данного вида животных. Содержание и манипуляции с животными проводили в соответствии с положением "Общих этических принципов экспериментов на животных, утвержденных первым национальным конгрессом по биоэтике" (Киев,2001г.). В ходе эксперимента оценивали внешний вид животных, их активность, состояние шерсти, глаз. Во время выполнения экспериментальной части соблюдались все правила обезболивания, асептики и антисептики.
В зависимости от действующих агентов животных подразделяли на три группы (табл. 2.1). Первую группу составили крысы, получавшие внутрибрюшинно золедроновую кислоту. Вторую группу составили крысы, получавшие гидрокортизон в чистом виде. Крысы, которые получали золедроновую кислоту в комбинации с гидрокортизоном, составили третью группу. Контрольные животные, получавшие физиологический раствор хлорида натрия - четвертую группу. Крыс каждой группы распределяли на подгруппы по срокам наблюдения в зависимости от продолжительности эксперимента.
Таблица 2.1
Распределение животных в зависимости от их принадлежности
к группам наблюдения
№ группыВоздействие на животныхСерии животныхСроки наблюденияВсего30 суток90 сутокIЗоледроновая кислота110102022020403101020IIГидрокортизон230-30IIIЗоледроновая кислота + гидрокортизон2202040IVФизиологический раствор хлорида натрия110102022020403101020Итоговсего230
По срокам наблюдения все животные каждой группы были распределены на 30 и 90 суток. Животных каждой группы подразделяли на серии в зависимости от возраста. Первую серию составили неполовозрелые крысы с исходной массой 50-55г (в возрасте 4 недель). Вторую серию составили половозрелые крысы с исходной массой 130-150г (в возрасте 2,5 месяцев). В третью серию вошли животные периода старческих изменений с исходной массой 290-310г (в возрасте 18 месяцев). Животные подопытных и контрольных групп находились в идентичных условиях и материал, взятый от них, обрабатывали параллельно.
Крысы первой группы получали препарат, который относится к V поколению бисфосфонатов, "Зомета" (золедроновая кислота) производства Novartis Pharma AG, Basel, Switzerland (регистрационный номер в Украине № Р.06.01./03.164, серийный номер 993 931.44-983/20 es). Применяли порошок золедроновой кислоты, который дозировали и растворяли стерильным изотоническим раствором хлорида натрия перед каждой серией инъекций в асептических условиях. Для этих целей 1 флакон, содержащий 4 мг сухого вещества золедроновой кислоты, был распределен на электронных аналитических весах на 8 равных порций по 0,5 мг. Каждую порцию помещали в отдельный флакон в асептических условиях и запаивали с последующим хранением при температуре + 9 0С. За 30 мин до начала инъекций в рабочий флакон шприцем вводили 8,8 мл растворителя. Приготовленный раствор содержал: в 0,1 мл - 0,00568 мг золедроновой кислоты; в 0,2 мл - 0,01136 мг; в 0,3 мл - 0,017 мг. Расчет дозировки всех вводимых лекарственных препаратов производили с помощью формулы расчета для крыс [117]:
где r - коэффициент видовой выносливости для крыс =3,62; R - коэффициент видовой выносливости для человека = 0,57; Dчеловека - средне терапевтическая доза лекарственного препарата, применяемая в клинике.
Рекомендуемая производителем Novartis Pharma AG, Basel, Switzerland, среднетерапевтическая доза - 4 мг на инъекцию 1 раз в 30 суток из расчета на 70 кг веса, что составляет 0.057 мг/1000г.
Доза для крысы = (3,62х0,057):0,57=0,362мг/1000г/месяц.
Для животных первой серии масса крысы составляет 52?1,3 г, значит, доза бисфосфоната - 0,018 мг/месяц. Для животных второй серии среднестатистическая масса крысы составляет 136,25?0,11 г, значит, доза - 0,049 мг/месяц. Для животных третьей серии среднестатистическая масса крысы составляет 310?1,9 г, значит, доза - 0,1086 мг/месяц. Каждая крыса из группы неполовозрелых животных (первая серия) получила по 0,0188 мг (0,3 мл); из группы половозрелых животных (вторая серия) - 0,049 мг (0,5 мл); каждая крыса периода старческих изменений (третья серия) получила по 0,1086 мг (1,8 мл). Препарат вводился животным 1 раз в месяц в утренние часы, путь введения - внутрибрюшинный, с соблюдением асептических условий. Таким образом, на 30 сутки каждая крыса получила соответствующую дозу бисфосфоната 2 раза, а на 90 сутки - 3 раза.
Крысы второй группы получали гидрокортизон. В эксперименте применялась стандартная ампулярная 2,5% суспензия гидрокортизона (серия №1720403 производства ВАТ "Фармак", г. Киев, регистрационный номер Р № UA/3288/01/01). Разовые дозы для человека колеблются от 5 до 25 мг, а курсы состоят из 3 - 5 инъекций [79]. В среднем курс составит 4 инъекции по 15 мг из расчета на семидесятикилограммовую массу тела, то есть (15х4):70кг, что составит 0,857 мг/кг - на курс из 4 инъекций, что применимо ко второй серии животных. Согласно формуле, доза для крысы (при данной средней терапевтической дозе для человека) = (3,62х0,857):0,57=5,4427 мг/1000г - на курс из 4 инъекций, тогда при массе крысы 136,25 г одна инъекция для половозрелой крысы составляет 0,250 мг, и такую дозу каждая крыса должна получить 4 раза [117]. Для первой серии животных среднестатистическая масса крысы составляет 52?1,3 г, значит, достаточно будет 3 инъекций на курс. Поскольк