Глава 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
В эксперименте исследования проведены in vivo и в условиях модельной системы.
Использованы кролики породы Шиншилла массой 2,0-2,5 кг, половозрелые особи в
возрасте 4 месяцев, содержащиеся в стандартных условиях вивария в течение всего
эксперимента. Всего использовано 695 кроликов.
Работу с экспериментальными животными проводили в соответствии с требованиями,
изложенными в “Международных рекомендациях по проведению медико-биологических
исследований с экспериментальными животными”, предложенными Советом
международных медицинских организаций в 1985 г., разработанным на их основе
приложении к Приказу Министерства здравоохранения СССР № 755 от 12.08.1987 г.
“О мерах по дальнейшему совершенствованию форм работы с использованием
экспериментальных животных”.
In vitro были использованы глаза кроликов, а также глаза молодых половозрелых
бычков. Всего использовано 207 глаз.
У лиц с возрастной катарактой (641 чел.) и волонтеров (128 чел.) для
определения исследуемых биохимических параметров использовали плазму и
эритроциты крови (всего 769 человек).
2.1. Методики моделирования катаракты in vivo (рис. 2.1)
2.1.1. Методика моделирования нафталиновой катаракты [274, 277]
Нафталиновую катаракту моделировали по способу Хокквина с соавт., в нашей
модификации: пероральное введение 5 мл суспензии нафталина с мукой из расчета 1
г на кг массы животного в течение 9 недель по схеме: 1-3 недели - введение
нафталина 2 раза в неделю через 2 и 3 дня соответственно;
4-6 недели - введение нафталина 3 раза в неделю через день; 7-9 недели -
введение нафталина 4 раза в неделю с интервалом в 1 и 2 дня, между кормлением.
Всего использовано 32 кролика.
2.1.2. Методика моделирования световой катаракты
Световую катаракту моделировали посредством общего облучения животных светом
высокой интенсивности, по спектральному диапазону, максимально приближенному к
солнечному (350-1150 нм) в течение 80 недель. Облучение проводили в режиме
светового дня с 9 до 18 часов ежедневно в квадратной комнате площадью 10 м2, в
условиях кондиционирования воздуха, двумя дуговыми ртутно-вольфрамовыми лампами
типа ДРВ-750 (плотность потока световой энергии 30 мВт/cм2; напряжение 220 В,
мощность 750 Вт, фитопоток - 20000 МФТ), расположенными в центре комнаты, на
равном расстоянии от пола и потолка. Животные находились в клетках с
решетчатыми боковыми и верхней стенками, внутренняя стенка оклеена серебряной
фольгой. Интенсивность излучения на уровне клетки была замерена прибором М210
Cog. Rad. и составила 4,75 мВт/см2. Всего использовано 126 кроликов.
2.1.3. Методика моделирования аминотриазоловой катаракты [190]
Аминотриазоловую катаракту моделировали с применением 0,20% раствора
аминотриазола (3-амино-IH-1,2,4-триазол) из расчета 100 мл на 1 кг массы
животного, который кролики получали с питьевой водой ежедневно, в одно и то же
время суток на протяжении 20-24 недель с ударными дозировками 1% раствора
аминотриазола в течение 10 дней. Всего использовано 37 кроликов.
2.1.4. Методика моделирования комбинированной (свет + аминотриазол) катаракты
Животные подвергались воздействию света высокой интенсивности (как описано в
разделе 2.1.2) и одновременно получали аминотриазол (как описано в разделе
2.1.3). Всего использовано 34 кролика.
2.1.5. Методика введения тетрахлорметана (СCl4) [221]
Животные получали внутримышечно 10% раствор СCl4 в стерильном персиковом масле
из расчета 1 мл на 1 кг массы животного, всего 5 инъекций с промежутками в 7
дней. Всего использовано 12 кроликов.
2.1.6. Методика моделирования комбинированной (свет + ССl4) катаракты
Животные подвергались воздействию света высокой интенсивности (как описано в
разделе 2.1.2) при одновременном введении СCl4 (как описано в разделе 2.1.5).
Всего использовано 22 кролика.
2.1.7. Методика моделирования комбинированной (аминотриазол + ССl4) катаракты
Животные получали аминотриазол (как описано в разделе 2.1.3) и одновременно
раствор СCl4. Всего использован 21 кролик.
2.1.8. Методика моделирования комбинированной (свет + аминотриазол + ССl4)
катаракты
Животные подвергались воздействию света высокой интенсивности (как описано в
разделе 2.1.2.) и одновременно получали аминотриазол (как описано в разделе
2.1.3) и СCl4 (как описано в разделе 2.1.5). Всего использовано 20 кроликов.
2.1.9. Методика введения фенобарбитала [263]
С целью индукции процессов дезинтоксикации до начала моделирования катаракты
животным вводили внутрибрюшинно суспензию фенобарбитала из расчета 50 мг на кг
массы животного, 3 инъекции, через 3 дня каждую. Всего использовано 5
кроликов.
2.1.10. Методика моделирования комбинированной (фенобарбитал + аминотриазол)
катаракты
Животные получали фенобарбитал (как описано в разделе 2.1.9). Повторный курс
перорального введения фенобарбитала проводили через 5,5 - 6 недель от начала
моделирования аминотриазоловой катаракты (как описано в разделе 2.1.3). Всего
использовано 15 кроликов.
2.1.11. Методика комбинированного введения фенобарбитала и тетрахлорметана
Животные получали одновременно фенобарбитал (как описано в разделе 2.1.9) и
раствор СCl4 (как описано в разделе 2.1.5). Всего использовано 11 кроликов.
2.1.12. Методика моделирования комбинированной катаракты (фенобарбитал +
аминотриазол + ССl4)
Животные получали сочетанно фенобарбитал (как описано в разделе 2.1.9),
аминотриазол (как описано в разделе 2.1.3) и СCl4 (как описано в разделе
2.1.5). Всего использовано 6 кроликов.
2.1.13. Методика введения диметилсульфоксида (ДМСО)
Животные получали 5,0% раствор ДМСО с питьевой водой ежедневно, в количестве
100 мл на 1 кг массы животного. Всего использовано 9 кроликов.
2.1.14. Методика
- Киев+380960830922