РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Исследования выполнены на 65 нелинейных белых крысах-самцах 6-8 месячного возраста в условиях хронического эксперимента. Всего проведено более 2000 исследований.
Животным под общим наркозом (этаминал натрия) стереотаксическим способом вводили долгосрочные нихромовые электроды в стеклянной изоляции с диаметром неизолированного кончика 100 мкм в структуры лимбико-неокортикальной системы мозга: дорзальный гиппокамп, латеральный гипоталамус, миндалевидный комплекс. Корковые нихромовые электроды вживляли эпидурально в лобно-теменную область. Стереотаксические координаты исследуемых структур определяли по атласу мозга крыс Сентаготаи и картам Е.Фифковой и Д.Маршала (цитировано по Буреш Я. и соавт.) [26]:
дорзальный гиппокамп Н - 3,5 L - 2,0 F - 2,0
латеральный гипоталамус H - 8,9 L - 0,5-0,7 F - 3,7
миндалевидный комплекс H - 7,8 L - 3,0 F - 1,0
лобно-теменная кора - L - 3,0 F - 3.5
Индифферентный электрод располагался в кости носовой пазухи. Нейрофизиологические эксперименты начинались на 4 - 5 день после стереотаксической операции.
Электрическую активность мозга регистрировали биполярно на электроэнцефалографах ЭЭГП4-02 и ЭЭ8Ч-2-05 до- и в течение 30 минут после воздействия.
Моделью отрицательных эмоциональных состояний являлась безусловно-рефлекторная реакция избегания, возникающая при стимуляции электрическим током структур лимбической системы и сопровождающаяся проявлениями страха и агрессии. Пороги возникновения отрицательных эмоциональных и судорожных реакций фиксировали при раздражении структур лимбической системы мозга электрическим током прямоугольной формы, частотой 50 Гц, силой 20-130 мкА, напряжением 1 В, длительностью импульса 0,5 с.
Регистрация электрокардиограммы проводилась в свободном поведении на электрокардиографе ЭК-2Т-02 с термозаписью в 3-х стандартных отведениях с применением съемных стальных электродов, прикреплявшихся к конечностям животных непосредственно перед исследованием.
Систолическое артериальное давление измеряли электроплетизмографическим методом на хвостовой артерии крыс с помощью графитового датчика, используя манометр и регистрируя пульсовую волну на осциллографе [117].
В качестве модели положительного эмоционального поведения использовали метод самостимуляции положительных эмоциогенных зон латерального гипоталамуса по методу Дж.Олдса и П.Милнера [228]. Сущность метода заключается в самостимуляции позитивных зон латерального гипоталамуса током прямоугольной формы частотой 50 Гц, силой до 250 мкА, напряжением 1 В, при длительности посылки импульсов 0,5 с путем периодического замыкания контактов электрической сети; число нажатий педали регистрировалось на автоматическом счетчике за 5-ти минутные интервалы в течение часа. При этом учитывали наличие серий посылок импульсов, пауз, периодов отдыха.
Ритмическое фотовоздействие частотами 4, 6 или 9 Гц проводилось последовательно, в течение трех дней на фоне второго получаса самостимуляции латерального гипоталамуса и осуществлялось с помощью фотостимулятора ФС - 03. Энергия, отдаваемая прибором в осветитель, была равна 0,035±0,007 Дж.
Самофотостимуляцию у крыс проводили с помощью оригинальной методики в течение 10 дней в затемненной комнате преимущественно во вторую половину дня. Для этого крысу на 1 час помещали в клетку с вмонтированными в нее тремя педалями для самофотостимуляции. Одно нажатие педали определяло посылку фотостимуляции длительностью 1с и частотой 4, 6 или 9 Гц соответственно. Животные в свободном поведении перемещались по клетке и произвольно выбирали педаль, а, следовательно, и наиболее "приемлемую" для себя частоту световых мельканий. Число нажатий каждой педали регистрировалось с помощью автоматического счетчика.
Экспериментальную модель эмоциональной гипертензии получали путем создания "конфликтной зоосоциальной ситуации". Для этого животных попарно ежедневно на 1 час помещали в камеру, к полу которой в вероятностном режиме подавался электрический ток пороговых значений (для возникновения ноцицептивных реакций). Стресс-воздействие продолжалось 2-3 недели и проходило под контролем артериального давления [29].
Во время экспериментов учитывалось эмоциональное поведение животных, выраженность общей двигательной активности и ориентировочно-исследовательской деятельности.
Для решения поставленных в работе задач были осуществлены три серии экспериментов. В первой из них исследовалось влияние ритмической фотостимуляции в диапазоне биопотенциалов мозга на контрольных крысах, во второй - на животных с эмоциональной гипертензией. В третьей серии экспериментов изучалось воздействие самофотостимуляции на функциональное состояние структур лимбико-неокортикальной системы мозга и сердечно-сосудистую деятельность крыс с эмоциональной гипертензией.
У животных каждой группы регистрировались исходные показатели электрической активности мозга и гемодинамики. В последующие дни исследований у крыс, вошедших в первую и вторую группы, регистрация электроэнцефалограммы, электрокардиограммы, артериального давления, порогов возникновения отрицательных эмоциональных реакций происходила ежедневно до- и после самостимуляции или сочетанного воздействия самостимуляции и ритмической фотостимуляции.
Во второй и третьей сериях экспериментов также фиксировали изменения исследуемых физиологических показателей после хронического эмоционального стресса.
В третьей серии экспериментов динамику артериального давления, электрокардиографических и энцефалографических характеристик у животных наблюдали после проведения самофотостимуляции.
Анализ электроэнцефалограмм проводили визуально, у части крыс- с помощью гистографического метода Фора [75].
Расчет частоты сердечных сокращений и амплитуды зубца R производился во II cтандартном отведении. Электрокардиограммы анализировались визуально.
Также в ходе исследований для оценки функци