ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Материалами данного исследования является изучение плацент женщин в сроке гестации 38-40 недель, которые были собраны на протяжении 1997-1998 г.г. в патологоанатомическом отделении детской областной клинической больницы г. Луганска. Объем исследования составил 60 плацент, включая плаценты при ЕРН-гестозах - ? группа (15 наблюдений), гипохромной анемии беременных - ?? группа (15 наблюдений), при сочетании анемии и ЕРН-гестоза - ??? группа (15 наблюдений). Данные группы плацент сравнивали с 15-ю плацентами клинически здоровых первобеременных женщин, имевших в анамнезе неосложненное течение беременности и родов (?V группа - контроль).
Предварительное изучение индивидуальных карт беременных, историй родов, историй развития новорожденных позволило провести тщательный отбор плацент ?-??? групп для морфологического исследования, которые соответствовали контрольным показателям по возрасту беременных, совместимости групп крови матери и ребенка (по системе АВ0 и резус-фактору), по времени наступления родов, анамнестическим данным.
Плаценты ?-ой группы были представлены последами женщин с ЕРН-гестозами средней степени тяжести (артериальное давление от 140/90 до 170/100 мм рт.ст., протеинурия до 2-3 г/л, задержка жидкости в тканях до 25%, локальные отеки). Длительность течения токсикоза во всех наблюдениях не превышала четырех недель до начала родов.
Вторая группа плацент (??) содержала последы женщин, у которых в сроке гестации 38-40 недель регистрировали гипохромную анемию 2-й степени (гемоглобин колебался в пределах 90-81 г/л).
В состав ???-ей группы вошли плаценты женщин, у которых беременность протекала при сочетании ЕРН-гестоза средней степени тяжести и гипохромной анемии 2-ой степени.
Забор материала проводился тотчас после рождения последа. При выборе участков плаценты для электронно-микроскопического исследования использовался принцип "случайного" отбора проб [3, 4, 93]. Кусочек ткани плаценты в капле охлажденного до 2-30С фиксатора разрезали на кубики объемом в 0,025 см3, которые переносили в свежий раствор фиксатора [35]. После предварительной фиксации в 2,5%-ном растворе глютаральдегида на 0,1М фосфатном буфере (рН=7,2) на холоде, ткань отмывали и переносили в 1% забуференный раствор четырех окиси осмия на 2-2,5 часа [35]. По окончании фиксации кусочки ткани промывали в нескольких сменах буферного раствора, дегидратировали в спиртах возрастающей концентрации (50, 70, 85, 96 и 1000) [35]. После чего ткань пропитывали в смеси эпоксидных смол (эпон и аралдит) и заключали в желатиновые капсулы [35]. Таким образом, от каждого случая получали от 4 до 5 блоков, с последующим изготовлением полутонких и ультратонких срезов.
Для количественного анализа изготавливали срезы из различных блоков и фотографировали большие площади среза [3, 4].
С целью получения воспроизводимых морфометрических характеристик изготавливали полутонкие срезы. Полутонкие срезы толщиной 0,5-1,0 мкм окрашивали 1% раствором толуидинового синего, с докраской пиронином и изучали под световым микроскопом при увеличении в 1250 раз.
Ультратонкие срезы изготавливали на ультрамикротоме УМТП-6, монтировали на палладированные сеточки с пленкой-подложкой из формвара, часть пленок укреплялась тонким слоем углерода, напыленного в вакууме. Срезы контрастировали раствором уранилацетата и цитратом свинца по Рейнольдсу [35].
Препараты исследовались в электронном микроскопе ЭМВ-100БР при ускоряющем напряжении 75 кВ. Увеличение подбиралось в соответствии с поставленной целью исследования и колебалось в диапазоне 2000-20000 крат. Для получения электронных микрофотографий использовали фотопластинки для ядерных исследований и фотопленки.
В каждом наблюдении изготавливали электронные микрофотографии, которые подвергались стереометрическому анализу методом точечного счета[3, 93]. Анализ производился следующим образом. На электронные микрофотографии плаценты накладывались прозрачные тест-системы, представляющие собой регулярные решетки. Шаг решетки выбирался в соответствии со средним размером анализируемых структур на микрофотографиях. Проводился дифференциальный подсчет точек, попадающих на структурные компоненты терминальных ворсин.
При стереометрии определялись удельные объемы структурных компонентов терминальных ворсин, в том числе микроворсинок, синцития, ядер синцития, эндоплазматического ретикулума синцития, митохондрий синцития, цитотрофобласта, базальной мембраны эпителия, интерстиция, фибробластов и его отростков, перицитов, базальной мембраны эндотелия, эндотелия капилляров и просвета капилляров. Кроме того, вычислялась абсолютная удельная поверхность мембран ядер синцития, цитотрофобласта, фибробластов, перицитов, эндотелия капилляров методом случайных секущих [79].
Морфологическое исследование электронно-микроскопических препаратов проводилось при увеличениях 5600 и 11200 крат. Стереометрия электроннограмм синцития, цитотрофобласта, базальной мембраны эпителия, интерстиция, фибробластов и его отростков, перицитов, базальной мембраны эндотелия, эндотелия капилляров и просвета капилляров осуществлялась при увеличении 5600 крат. Количественный анализ микроворсинок СТБ, ядер: синцития, цитотрофобласта, фибробластов, перицитов и эндотелия капилляров, эндоплазматического ретикулума синцития, митохондрий синцития, слоев базальной мембраны эпителия проводился при увеличении 11200 крат.
Поскольку, полученные в результате исследования данные, не имели очевидных противоречий относительно нормальности распределения вариационного ряда, мы использовали параметрический метод оценки отличий средних двух выборок по критерию Стьюдента (t), используя программно-математический комплекс для ПК MS Excel 7.0 и компьютерную систему для статистического анализа данных STATISTICA. При этом рассчитывали среднее арифметическое значение (М), стандартную погрешность (m) и достоверность отличий между отдельными показателями в группах [3, 20, 51].
- Київ+380960830922