<p style="font-family: 'Times New Roman', 'Times', serif; font-size: 18px; background-color: #ffffff;"><span style="background-color: #ffffff;">Глава 2. ОБЪЁМ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.<br /> <br /> Для реализации поставленных задач, выяснения роли генетических и внешнесредовых факторов в формировании ЗПР, предпринято исследование на базе ИОЗДП АМН Украины (г.Харьков), результаты которого представлены в настоящей работе.<br /> Под наблюдением находилось 116 подростков с конституциональной задержкой полового развития в возрасте 14-17 лет, ранее не лечившихся по поводу данного заболевания. Все подростки были русской и украинской национальности.<br /> Диагноз ЗПР конституционального генеза у всех мальчиков-подростков был выставлен в отделении эндокринологии на основании комплексного клинико-лабораторного исследования, которое предусматривало оценку физического и полового развития, определение морфотипа, костного возраста, а также изучение гонадотропной функции гипофиза и функционального состояния яичек. Все мальчики-подростки были осмотрены специалистами-консультантами в консультативной поликлинике ИОЗДП АМНУ: педиатром или подростковым терапевтом, психоневрологом, окулистом, отоларингологом, стоматологом, а при необходимости гастроэнтерологом, кардиологом<br /> Физическое развитие оценивалось у всех больных с конституциональной ЗПР по линейным диаграммам [120].<br /> Определение морфотипа проводилось по таблице морфограмм, разработанной отделом андрологии Харьковского НИИ ЭиХГ под руководством А.Н.Демченко [121]. <br /> Уровень полового созревания оценивался по индексу маскулинизации, который определялся по методу, предложенному А.Н. Демченко с соавт [121]. Нормативные значения индекса маскулинизации для каждого возраста были получены на основании данных осмотра 2956 здоровых мальчиков-подростков 12-18 лет г.Харькова [122].<br /> Степень задержки полового развития определялась по дефициту полового созревания (разнице между паспортным возрастом и достигнутым уровнем полового созревания). Дефицит полового созревания в 2 года оценивался как ЗПР I степени, 3 года - ЗПР II степени, 4 года и более - ЗПР III степени [123]. Состояние гонадотропной функции гипофиза изучалось на основании определения в сыворотке крови уровня гонадотропных гормонов ( лютропина и фоллитропина) методом иммуноферментного анализа на фотометре Cabas EIA концерна "Ф.Хоффман-Ла Рош" с использованием коммерческих наборов. Функциональное состояние яичек оценивалось по уровню тестостерона и эстрадиола в сыворотке крови радиоиммунологическим методом с использованием наборов опытного производства ИБОХ Белоруссии. Определялась также суточная экскреция 17-кетостероидов калориметрическим методом по Н.В. Самосудовой и Ж.Ж.Басс [124]. Нормативные показатели гормонов и биологически активных веществ получены в лабораториях ИОЗДП АМНУ при обследовании здоровых школьников г.Харькова [122, 125].<br /> Для решения основной задачи выполнено генетическое исследование, включающее генеалогический, иммуногенетический (HLA-типирование) и цитогенетический (оценка ассоциаций акроцентрических хромосом) методы анализа. Так, для установления факта наследственной предрасположенности к нарушениям репродуктивной функции у пробандов было составлено и изучено 116 родословных с проведением последующего генеалогического анализа, включающего компонентный анализ с выделением средовой и генотипической компоненты. <br /> Поскольку компонентный анализ базируется на интерпретации коэффициентов корреляции, полученных в результате изучения особенностей распределения признака между различного типа родственниками, были просчитаны коэффициенты корреляции между родителями и пробандами (rрод ) и между сибсами и пробандами (rсибсы) [126]. <br /> Уравнения для разложения дисперсии записываются в следующем виде:<br /> Ga = 2rрод = h2<br /> Gd = 4(rсибсы-rрод)<br /> G = Ga+Gd<br />E = 1-G, <br />где rрод и rсибсы - коэффициенты корреляции между родственниками;<br />Ga - доля генетического аддитивного компонента в фенотипической дисперсии;<br />Gd-доля генетического доминантного компонента;<br />Е-средовой компонент;<br />G-генетический компонент;<br />h2-коэффициент наследуемости.<br /> У 85 мальчиков-подростков проведено иммуногенетическое исследование, включающее изучение распределения антигенов I и II класса системы HLA. Основным способом исследования I класса системы HLA было типирование антигенов HLA в стандартном лимфоцитотоксическом тесте по П. Терасаки в модификации Ж. Доссе [127]. Лимфоциты для исследования были получены из периферической венозной крови, выделены на градиентне плотности фиколл-верографин и проинкубированы с антителами в присутствии комплемента (комплементзависимый лизис лейкоцитов). Специфическое присоединение антител к связанным с клеточной мембраной молекулам HLA приводит к локализованному разрушению оболочки лимфоцита. Количество живых и погибших прокрашенных эозином клеток оценивалось под микроскопом по стандартной 8-бальной шкале [128]. Для проведения исследования использовали тест-панель (№38) антилейкоцитарных типирующих сывороток производства НИИ гематологии и переливания крови Минздрава РФ (г.Санкт-Петербург). Исследованы 18 специфичностей локуса А и 25 специфичностей локуса В.<br /> Для выявления антигенов II класса использовался пролонгированный микролимфоцитотоксический тест. Разделение лейкоцитов на Т- и В- фракции проводилось в разделительной колонке и основывалось на свойстве В-лейкоцитов прилипать к синтетическому волокну во время инкубирования в термостате. Для гистотипирования антигенов II класса использовалась панель №41 производства НИИ гематологии и переливания крови Минздрава РФ (г.Санкт-Петербург). Исследованы 8 специфичностей локуса DR. Исследования проводились с помощью бинокулярного микроскопа фирмы Карл Цейс Йена при увеличении: окуляр 10х, объектив 8х. <br /> Полученные результаты сравнивались с данными о частоте встречаемости антигенов системы HLA I класса у жителей Юго-Востока Украины [129], у жителей (доноров) г.Киева [130] и доноров г.Харькова.<br /> Данные по частотному распределению антигенов HLA 1 класса у доноров г.Харькова были получены в результате типирования 731 донора Харьковской областной</span></p>
- Київ+380960830922