РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Исследования выполнены в условиях хронического эксперимента на 49 нелинейных крысах-самцах четырех возрастных групп: 17 крысах 1-месячного, 13 крысах 3-месячного, 12 крысах 12-месячного и 7 крысах 24-месячного возрастов. Всего выполнено более 800 исследований.
Животным в состоянии наркоза (внутримышечное введение этаминала натрия, 55 мг на 1 кг веса), с использованием стереотаксического прибора венгерского производства МВ-4101, вживляли долгосрочные нихромовые электроды в стеклянной изоляции с диаметром неизолированного кончика в 100 мкм, в следующие отделы мозга: гиппокамп - зону СА-1 (Hipp), латеральный гипоталамус (Hpt), мезэнцефалическую ретикулярную формацию (Rf). Корковые нихромовые электроды (Cort), того же диаметра в виде спирали в 3 - 4 витка, вводили эпидурально над сенсомоторной областью коры головного мозга. Стереотаксические координаты исследуемых структур мозга крыс определяли по координатам Е. Фифковой и Д. Маршала (цитировано по Я. Бурешу с соавт.) [27] в модификации Т.М. Воробьевой [42]. Стереотаксические координаты структур мозга крыс в разные периоды онтогенеза представлены в табл. 2.1.
Референтный электрод, такого же типа, как и корковый, но выполненный из нихрома диаметром 200 мкм, укрепляли в кости носовой пазухи. Стальные миографические электроды имплантировали в область верхней косой мышцы шеи, кардиографические - под кожу передних конечностей.
Эксперимент проводили на 3-4 дни после стереотаксической операции.
Биполярную запись электрической активности мозга: новой коры, дорзального гиппокампа, латерального гипоталамуса, мезэнцефалической ретику лярной формации, ЧСС и ЭМГ, осуществляли на 8-канальном электроэнцелографе EEG - 8S ("Медикор", Венгрия) с вводом ЭЭГ-сигналов в персональный
Таблица 2.1.
Стереотаксические координаты структур мозга крыс в разные периоды онтогенеза.
Структура мозгаВозраст крыс1 мес3 мес12 мес24 месF,
ммL,
ммH,
мм F,
ммL,
ммH,
мм F,
ммL,
ммH,
мм F,
ммL,
ммH,
мм Cort2,11,6-2,52,0-3,53,0-3,53,0-Hipp1,40,8-1,02,92,31,2-1,53,32,02,03,52,02,03,5Hpt2,20,3-0,58,12,30,5-0,78,93,70,7-1,08,93,70,7-1,08,9Rf6,01,0-1,57,56,0-6,51,5-2,08,56,31,5-2,08-96,31,5-2,08-9
компьютер. Полиграфическую регистрацию цикла Б-С проводили в дневное время, в экранированной камере, на протяжении трех часов с 10?? до 13??. По электрографическим, электромиографическим, электрокардиографическим и поведенческим характеристикам выделяли бодрствование, медленный поверхностный, медленный глубокий и парадоксальный сон [80].
САД измеряли электроплетизмографическим методом с хвостовой артерии, с использованием графитового датчика, ртутного манометра и регистрацией пульсовой волны на экране индикатора импульсов "ИМ-789" [152].
Регистрацию ЭКГ проводили у крыс в условиях свободного поведения на ЭК2Т-02 в трех стандартных отведениях, с применением стальных съемных электродов, прикреплявшихся к конечностям животных непосредственно перед исследованием. Запись производили при скорости движения ленты 50 и 100мм/с.
Состояние острого эмоционального стресса формировали путем создания "конфликтной зоосоциальной ситуации" при ноцицептивном электрокожном раздражении конечностей животных. Для этого 5-6 крыс помещали в камеру, к полу которой подведен ток напряжением 30 - 50 В. Длительность раздражения составляла 15с, с последующей паузой в 10 с, воздействие осуществляли в течение 1 часа. Состояние хронического стресса формировали в тех же условиях, повторяя аналогичные сеансы на протяжении 5 дней [34].
Измерение САД, запись ЭКГ и регистрацию цикла Б-С осуществляли до и после острого и хронического эмоциональных стрессов.
После завершения нейрофизиологического эксперимента эвтаназию крыс осуществляли внутрибрюшинным введением летальной дозы этаминала натрия (трехкратная наркотическая доза). Электролитическую маркировку локализации электродов в структурах мозга животных проводили путем пропускания постоянного тока силой 5 мА в течение 15 с. Мозг извлекали из черепной коробки и фиксировали в 10 % растворе формалина. Верификацию локализации электродов осуществляли на фронтальных гистологических срезах мозга фотоконтактным способом.
А Б В
Рис. 2.1. Верификация локализации электродов (фронтальные срезы мозга): А - гиппокамп,
Б - латеральный гипоталамус,
В - мезэнцефалическая ретикулярная формация.
Наряду с визуальным анализом электрографических показателей процессов Б-С определяли процентное содержание периодов бодрствования и фаз сна, неполных "редуцированных" циклов (лишенных фазы парадоксального сна) от общего количества циклов, учитывали значения латентных периодов возникновения медленного поверхностного сна (время от начала регистрации до наступления первых электрографических признаков медленного поверхностного сна), медленного глубокого и парадоксального сна (время от момента наступления стадии поверхностного сна до первых признаков медленного глубокого и парадоксального сна) [38]. Определяли средние показатели ЧСС и визуально оценивали амплитуду ЭМГ в бодрствовании и фазах сна.
Спектральный анализ паттернов ЭЭГ новой коры, дорзального гиппокампа, латерального гипоталамуса, мезэнцефалической ретикулярной формации проводили в стадиях и фазах цикла Б-С в диапазоне частот от 1,0 до 35 Гц с разбивкой по ритмам (1,0-4,0; 4,0-7,0; 7,0-13,0; 13,0-35,0 Гц), соответствующих ?-, ?- , ?- и ?- колебаниям [172]. Данные ЭВМ получены в табличной и графической формах. Всего построено 147 циклограмм и 700 спектрограмм ЭЭГ бодрствования и сна.
Производили количественную обработку вегетативных показателей: САД и ЭКГ компонентов, регистрируемых в фазу бодрствования. Математический анализ ЭКГ проводили путем определения амплитуды и длительности зубцов Р, Т, R,