ГЛАВА 2.
ОРГАНИЗАЦИЯ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Организация исследования
Работа выполнена на базе НИИ медицинских проблем семьи (директор - д.м.н., проф. А.В. Чайка), Донецкого регионального центра охраны материнства и детства Министерства здравоохранения Украины (генеральный директор - чл.- кор. АМНУ, д.м.н., проф. В.К. Чайка)
Данное исследование соответствует всем этическим нормам, предъявляемым к научным работам, на что было получено разрешение этического комитета ДонГМУ. Перед началом обследования все пациентки были информированы о характере клинического исследования, о применяемых препаратах, и возможных побочных эффектах. Исследования проводились после получения согласия на участие в них (рис. 2.1).
Рис. 2.1. Группы обследованных пациенток
Для достижения поставленной цели и решения задач была разработана программа исследований, предусматривающая 5 этапов (рис. 2.2).
Рис. 2.2. Организация исследования
Для выполнения 1 этапа и выяснения состояния репродуктивного здоровья пациенток после искусственного прерывания беременности в ранних сроках гестации и определения факторов риска, возникновения осложнений, проведен ретроспективный клинико-статистический анализ по данным 500 анкет женщин, прерывавших беременность в ранних сроках в НИИ МПС и ДРЦОМД.
На 2 этапе проведено комплексное обследование 235 женщин в возрасте 17-38 лет (клиническое, инструментальное, лабораторное), которые были распределены на группы (рис. 2.1). Пациентки основной, группы сравнения и контрольной обследовались в день обращения, на 3 и 10 сутки после аборта. На каждую пациентку оформлялась медицинская карта амбулаторного больного (уч. форма № 025 - 1/у, № 003-2-у-88) (приложение А, Б, В), в которую вносились результаты анамнеза, клинико-лабораторных исследований, описание способа прерывания беременности, особенности течения послеоперационного периода, сведения о восстановлении менструальной функции, особенности состояния здоровья в течение первого года после аборта. Помимо этого заполнялась карта индивидуального наблюдения. Для изучения психо-эмоциональной составляющей качества жизни, на 2 этапе проведено психодиагностическое обследование 210 женщин перед прерыванием беременности различными методами, которые были распределены на группы: 1 группа 110 женщин - на МПБ и 2 группа 100 женщин -на вакуум-аспирацию.
Для выполнения 3 этапа проведено комплексное обследование 210 женщин после прерывания беременности на 3 и 10 сутки. Из них 110 женщин основная группа и 100 группа сравнения. Проведен сравнительный анализ между пациентками, прерывавшими беременность медикаментозным методом 1 группа и вакуум-аспирацией 2 группа.
В 4 этап включены направления по разработке и внедрению комплекса мер по профилактике ранних и поздних послеабортных осложнений, определены критерии прогнозирования и проведен корреляционный анализ между изучаемыми показателями и осложнениями (приложение Д); изучено контрацептивное поведение после прерывания беременности.
Эффективность профилактических мероприятий исследована на 5 этапе, а так же разработана схема путей профилактики и изучены отдаленные последствия нарушений репродуктивной системы.
Рис. 2.3. Методы исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Клинические методы исследования
Сбор анамнеза, общий и гинекологический осмотр, лабораторные исследования, необходимые для выполнения оперативного вмешательства
определение группы крови и резус-фактора, реакции Вассермана, анализ выделений. Анализ крови проводился дважды: перед абортом и на 10 сутки после вмешательства. У обследуемых пациенток кровь для исследований забирали с 9 до 11 часов утра из локтевой вены натощак в объеме 10 мл, стерильно. Перед взятием крови у обследуемых пациенток ограничивали прием кофе, крепкого чая, бананов, сыра, шоколада (в течение 2-х суток), а также некоторых медикаментов (аспирина, салицилатов, тетрациклина, ампициллина, эритромицина, хинин-содержащих препаратов) - по возможности, в течение 8 суток.
2.2.2. Иммунологические методы исследования.
Иммунологические исследования проводились в лаборатории НИИ МПС и в Центральной научно-исследовательской лаборатории ДонГМУ им. М. Горького (руководитель - профессор Прилуцкий А.С., ст.н.с. - Зяблицев С.В.).
Иммунологическое обследование включало: определение экспрессии активационных молекул на поверхности лимфоцитов с помощью моноклональных антител на аппаратах MULTYScan (Finland) и FACScan ("Becton Dickinson", USA) методом проточной цитoфлюoримeтpии [129].
Для исследования использовали следующие моноклональные антитела, конъюгированные с флюоресцеинизoтиоцианaтoм (FIТC): CD25, CD95, CD 11b и НLA DR ("МедБиоСпектр", Москва). Окрашивание клеток проводили по стандартной методике [213]. Анализ экспрессии aктивaционных молекул проводили в лимфоцитарном гейте, который включал не менее 95% клеток с фенотипом CD45 + CD14. В каждом образце анализировалось не менее 10000 клеток. Обработку результатов проводили с использованием программы LYSIS II:
- определение выработки лимфоцитами миграции ингибирующего фактора (MIF) в ответ на стимуляцию фитогемагглютинином (ФГА) в прямом капиллярном тесте с расчетом (МИ) миграционного индекса [43];
- определение уровня сывороточных иммуноглобулинов (Ig) классов G, А, М методом радиарной иммунодиффузии по G. Manqhini et. al. [188]
- определение бактерицидной активности в реакции спонтанного (НСТ) и стимулированного зимозаном (НСТз) восстановления нейтрофилами нитратетразолиевого синего (НСТ-тест) с определением количества НСТ-позитивных клеток [28];
- определение индекса нейтрофильной активации (ИНА) по формуле:
,
где НСТ - показатель относительного количества НСТ-позитивных клето