ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Работа выполнялась в течение 2004-2006гг. в Донецком региональном центре охраны
материнства и детства (ДРЦОМД, генеральный директор –
чл.-корр. АМН Украины, д.мед.н., проф. Чайка В.К.).
Иммунологические исследования проводились в лаборатории НИИ медицинских проблем
семьи, лаборатории ДРЦОМД. Морфологическое исследование послеоперационного
материала проводили в отделении патоморфологии Городской клинической больницы
№1 г. Донецка.
Гнойно-воспалительные заболевания гениталий приводят к длительному
рецидивирующему течению с образованием тубоовариальных опухолей и потере
репродуктивной и генеративной функций. В связи с этим нами предложено с целью
оптимизации лечения ГВЗ гениталий включить в комплексную схему
экстракорпоральную антибиотикотерапию.
2.1. Материалы исследования
На первом этапе проводился анализ архивного материала историй болезни женщин,
поступивших на лечение в гинекологическое отделение ДРЦОМД в связи с наличием
воспалительного процесса гениталий. Было проанализировано 720 историй, из них
153 с гнойно-воспалительными заболеваниями.
На втором этапе проведено проспективное обследование 65 женщин с наличием
гнойно-воспалительных заболеваний внутренних гениталий в возрасте от 15 до 49
лет и 27 здоровых женщин фертильного возраста (рис.2.1).
Рис.2.1. Методология исследования
Деление на группы проводилось методом случайного добровольного анонимного
выбора. Пациентки были разделены на группы:
I группа – основная – 32 женщины репродуктивного возраста с
гнойно-воспалительными заболеваниями, получавшие комплексное лечение с
включением экстракорпоральной антибиотикотерапии;
II группа – сравнения – 33 пациентки репродуктивного возраста с
гнойно-воспалительными заболеваниями, получавшие традиционную комплексную
терапию. В обеих группах по показаниям проводилось оперативное лечение.
Контрольную группу составили 27 соматически и гинекологически здоровые женщины
фертильного возраста.
Всем женщинам проводилось обследование иммунного статуса, гемостаза и
бактериальный мониторинг.
На третьем этапе разработан и внедрен комплекс лечебных мероприятий с
включением экстракорпоральной антибиотикотерапии, который проводился под
контролем клинико-лабораторных показателей.
На четвертом этапе-оценена эффективность внедренной методики и разработаны
практические рекомендации.
2.2. Методы исследования
У всех женщин изучали гинекологический анамнез, а также условия работы, жизни,
наличие профессиональных вредностей, перенесенных ранее заболеваний, операций.
Для выявления экстрагенитальной патологии все женщины были проконсультированы
терапевтом, а при необходимости - другими специалистами: эндокринологом,
невропатологом, окулистом, хирургом.
Состояние наружных и внутренних половых органов оценивали при гинекологическом
и ультразвуковом исследованиях, кольпоскопии, рентгенографии.
Все больные обследованы при помощи инструментальных и лабораторных методов:
проводился общий анализ крови и мочи, исследовались показатели гемостаза и
иммунологическая реактивность, посевы из цервикального канала и очага
воспаления при оперативных вмешательствах для определения микрофлоры и ее
чувствительности к антибиотикам.
Ультразвуковое исследование органов малого таза производилось всем больным с
помощью ультразвукового аппарата «Kransbuhler SonoSkop 20» (Германия) c
использованием трансабдоминального и трансвагинального конвексных датчиков с
частотой 3,5 и 5 МГц соответственно.
Иммунный статус оценивали по показателям клеточного иммунитета и его
субпопуляций: Т-клетки, Т-хелперы (СD4), Т-супрессоры (CD8), СD4/CD8, CD16,
В-клетки (CD22); гуморального иммунитета: иммуноглобулины (Ig) A, M, G;
циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) (Ю.А.Гриневич, А.Н.Алферов,1981),
фагоцитарной активности лейкоцитов (ФАЛ), которая устанавливалась в тесте с
нитросиним тетразолем (B.H.Park, 1968). Индекс фагоцитарной активности
нейтрофилов рассчитывался по формуле:
И=(a+2b+3c)/n
a, b, c – процент клеток с включениями (нерастворимые гранулы диформазана),
занимающими соответственно до 1/3, от 1/3 до 2/3 и более 2/3 площади клетки.
Содержание лейкоцитов и дифференциальный подсчет лейкоцитарной формулы
осуществлялся унифицированным методом морфологического исследования форменных
элементов крови с приготовлением гематологического мазка. Показатели экспрессии
мононуклеарами крови молекул CD3, CD4, CD8, CD22, CD16 определяли с помощью
соответствующих моноклональных антител фирмы «Ortho» в реакции прямой
иммунофлюоресценции.
Содержание Ig G, A, M в сыворотках крови определялось методом радиальной
иммунодиффузии (G.Mancini et al., 1965) с использованием соответствующих
антисывороток производства Московского НИИ вакцин и сывороток им.
И.И.Мечникова.
Состояние фагоцитарной системы изучали путем постановки классического
фагоцитоза по методу Коста Е.А. и Стенко М.И.,1984. Иммунный ответ организма на
воспаление оценивали по определению интерлейкинов: IL2, IL6, фактор некроза
опухоли (ФНО). Их определяли с помощью метода моноклональных антител (ООО
«Протеиновый контур», Санкт-Петербург).
Состояние системы неспецифической защиты изучали с помощью метода определения
концентрации лизоцима крови по Бухарину,1989. Иммунологические исследования
проводили до и после лечения.
Проведены бактериологические исследования культуральным методом. Исследуемым
материалом являлось содержимое операционного материала - очаг гнойного
воспаления: матка, фоллопиевы трубы, яичники
- Київ+380960830922