РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материал исследования
В соответствии с целью и задачами исследования нами изучены закономерности
изменения кожи и ее гемомикроциркуляторного русла при гипертермии,
обусловленной введением пирогенала на 148 беспородных половозрелых [52] самцах-
крыс с массой тела 140- 210 граммов. Крысы в течение двух недель перед началом
эксперимента находились в карантине в обычных условиях вивария. Температуру в
комнате вивария, где удерживали животных, постоянно сохраняли в пределах 26 –
28 °С.
Все опыты выполнены в период с 10-ти до12 часов с соблюдение правил
„Европейской конвенции защиты позвоночных животных, которые используются в
экспериментальных и других научных целях” (1983). Согласно выводов комиссии по
биомедицинской этики Днепропетровской государственной медицинской академии
(протокол № 9 от 21.03.2008 г.), исследования выполнены с соблюдением
общепринятых норм морали, требований прав, интересов и личных достоинств автора
исследования. Крысы для исследования были разделены на четыре группы:
1-я группа – контрольная;
2-я группа – крысы, которым одноразово внутрибрюшинно вводили пирогенал;
3-я группа – крысы, которым два раза внутрибрюшинно вводили пирогенал;
4-я группа – крысы, которым три раза на протяжении трех суток внутрибрюшинно
вводили пирогенал. Крыс контрольной и экспериментальных групп выводили из
эксперимента, после предварительно проведенного эфирного наркоза, путем
декапитации (рис. 2.1).
Рис. 2.1. Дизайн эксперимента. Сроки выведения крыс из эксперимента
Прямокишечную температуру и температуру кожи измеряли с помощью
электротермометра с точностью до 0,1 °С. У экспериментальных животных
большинство авторов температуру тела определяют ректально. Ректальная
температура наиболее объективно отражает внутреннюю температуру тела, как
человека, так и животных, и в среднем она несколько выше кожной температуры и
равняется 37 єС. Оральная температура также является стабильным показателем и
объективно отражает температуру тела. Нормальная температура кожи 29,5 °С –
33,9 °С. Температура кожи зависит от времени суток, питания, функционального
состояния организма, она различна в разных участках кожи и колеблется от 31,1
°С до 36 °С у человека, у животных она несколько ниже. В складках кожи
температура может достигать 37 °С в норме.
Пирогенал вводили крысам внутрибрюшинно утром одноразово, два раза и три раза в
течение первых, вторых и третьих суток. Группа крыс, которым была введена одна
доза, наблюдалась на протяжении 7 суток. Крысам третьей группы пирогенал
вводили два раза на протяжении двух суток и потом наблюдались также на
протяжении семи суток. Крысам четвертой группы пирогенал вводили три раза на
протяжении трех суток и наблюдали тоже в течение семи суток.
Из опыта выводили животных в первые 3, 7 часов и в последующем через 12 часов,
24, 48 и 72 часа. На протяжении эксперимента крысам измеряли ректальную
температуру и температуру различных участков кожи.
Массу животных (М) и абсолютную массу кожи (АМШ) определяли с помощью
электронных весов с точностью до 1 грамма. Относительную массу кожи ВМШ)
рассчитывали за формулой: АМШ / М х100. Количество волос на 1 смІ кожи
определяли путем подсчета после предыдущего бритья кожи. Кусочки кожи из разных
участков (1 – спина; 2 – живот; 3 – стопа; 4 – кисть; 5 – передняя поверхность
предплечья; 6 – задняя поверхность локтевого сустава; 7 – грудь; 8 – задняя
поверхность коленного сустава ) фиксировали в 10%-ом растворе нейтрального
формалина в растянутому виде. После фиксации кусочки кожи промывали,
обезвоживали, заливали в парафин. Срезы кожи толщиной до 10 мкм готовили на
ротационном микротоме.
2.2. Методы исследования
Для выполнения поставленных задач исследования был использован комплекс
методов, в который включали методы изучения кожи на макроскопическом уровне,
фрагментах кожи, на уровне ее отдельных структурных компонентов на
гистологических срезах, морфометрию и гистометрию. Все полученные
количественные данные были обработаны с помощью вариационно-статистического
метода с использованием корреляционного анализа.
2.2.1. Методы изучения кожи на макроскопическом уровне:
а). Измерение кожно-жировой складки (КЖС) проводили с помощью калипера. У
наркотизированной крысы с помощью эфирного масочного или гексеналового наркоза
с помощью калипера захватывали участок кожи и измеряли толщину КЖС не менее
трех раз на каждом участке. Средний размер КЖС заносили в протокол. Величина
КЖС зависит от многих причин. В связи с чем определение этого параметра
проводили в стандартных условиях. Определение этого параметра имеет важное
значение при изучении динамики кровенаполнения кожи, ее отека;
б). Измерение массы крысы и массы изолированной шкуры. Массу крыс измеряли
путем взвешивания на электронных весах перед отбором в группы и после окончания
эксперимента. Массу изолированной кожи измеряли на электронных весах после
препарирования и последующего отсечения. Доля массы кожи в общей массе
животного является важным показателем для оценки функционального состояния
организма;
в). Определение удельной массы (УМК) фрагментов кожи осуществляли с помощью
математической формулы:
УМК (г/ смі = Мк / V, где (2.1)
Мк – масса фрагмента кожи, которая измерялась с помощью электронных весов;
V (смі) – объем фрагмента кожи, который определяли по методу вытесненной воды.
Предварительно взвешенный кусочек кожи помещался в воду и по уровню увеличения
столба воды определяли объем фрагмента кожи. Этот морфофункциональный параметр
характер
- Київ+380960830922