Работа выполнена на Государсгвсшюм Щелковском биокомбинате , Всероссийском Государственном науито-ксследояательсхом институте контроля , стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов и Всероссийском наулю-исследовательском и технолопгтеском институте биологической промышленности.
Официальные оплонстгш:
Заслуженный деятель науки РФ, доктор встерюсарных наук, профессор Л.В. Кириллов (ВГНКИ);
Заслуженный ветеринарный врач РФ, доктор ветеринарных наук ИЛ*. Тятаринцеп (МГУПБ);
Доктор ветеринарных наук В.И. Белоусов (Департамент ветеринарии РФ).
Московская государствсзшая академия ветеринарной меднцктл и биотехнологий имени К.И. Скрябина
*
'
Защттта диссертации состоите Дании диссертационного совета Д.С ном университете прикладной био. ул. Талалихина, 33.
1 Госудзрст вен-49316, Москва
С диссертацией в виде научи лиотскс МГУ прикладной бютшмодс
1Я в биб-
Дисссрлашы в л иле н аут от г
•139 г.
Ученый секретарь диссертационного совета кандидат ветеринарных наук
✓ *
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
:• 1.1. Актуальность проблемы. В 08ц(іМ комплексе »етеримарко-санитармых мероприятий, направленных на борьбу с инфекционными болезнями сел ь с кохоз к йс г вс иных животных и рыб важное «начете имеют специфическая профилактика и своевременная диагностика.
Обеспечение животноводства эффективными кмпедюетовпособными профклактическими и диагностическими препаратами, одна ю главных задач ученых и практиков биологической промышленности. Создание высокоэффективных биологических препаратов предусматривает проведение работ по технологическому и техническому переоснащенню кх производства на основе достижений биотехнологии.
Большое количество работ посвящено вопросам технологий производства диапюсгикумоя и вакцин против бруцеллеза: Злроловсхий ПФ., 1927; Nuddlexon, 1929; Полик EX. 1953; Трилемко ПА, 1957; Alton D., 1961; Орлов E.C., 1964, МкдеВковская T.C., 1972; Михайлов H.A., 1972, Салмаков В.К., 1980; Иванов HJL, 1984; Шумилов К.В., 1987 и др.
Перевод культивирования бруцедд с плотных питательных сред ка глубинный метод требует новых технологических подходов к системам управления культивированием, подбора состава питательной среды, решения вопросов пеногашения и конияприровакия бактериальной массы
Бактериальный метод определения количества живых бруиелл в вок-цшю недостаточно совершенен, длителен и зависит от ряда факторов качества питательной среды , режима стсриликпрш и др.
Определение количества живых бруцедд штамма 19 в вакцине, основанной на дегидрогеназной активности бруцедд с применением метиленового синего и сафранина испытали: Дсльни, 1958, Иванов М.М., 1962, Да-цевич Л И., 1976. Методика определения не нашла практического применения в связи с тем. что авторы не учли самоокислкгадытых свойств метиленового синего, применение которого в аэробных условиях іфиводнло к разноречивым рсіультятам
ме-
ста
utx
кНИГА ИМЕЕТ
ГИБ
ТО-92; эна
С.,
Таблица 3
Результаты определения количества доз вакинны
Л> серии пякинпы Количество доз (метод)
биохимический бактериологический
Пз штамм* 19
43 16.9 16.5
44 17.2 19,0
45 17.3 17.4
120 20.6 20.9
138 18.1 16.1
106 21.5 18.5
107 - 20.0 19.0
108 | 16.5 16.0
109 18,5 18.0
4 18.5' 18,0
Средний результат 18,5 ±0.72 17,9 ±0.59
Из штамма 82
0143 15.5 15.0
0148 15,5 15.5
0173 22.0 20.0
0184 17.0 16.5
0187 17.5 17.0
0188 15.5 15.0
035 16.5 16.0
039 16.0 15.0
040 17.0 16.5
045 17,0 16,0
Средний результат 16.95 ±0.95 16,25 ±0,57
16
Биохимический метол определен)« числа жилых бручСЛЛ заключается в следующем. Готовили р&додетше вакцины (сырья) 1:10,1:15 и 1:20 на фго-растаорс, видный раствор метиленовою синего (1:5000) и вазелиновое масло. Вес указанные компоненты прогревали в водяной бане в течение 30 мня. при температуре 37 ± 0,5°С
По окончании прогревания в водяной Гшле и каждое ратедепие вакцины (сырья) вносили по 0,1 ем1 рабочего раствора метиленовою синею и по 0.5 ем3 вазелинового масло. После внесения указанных компонентой пробирки одповремешю встряхивали и помещали я водяную баню и сразу начинали отсчитывать время по секундомеру и контролировать визуально время кіменеїшя цвета (обесцвечиваю») содержимого пробирок. Окончанием реакции в каждой пробирке считали момент полного обесцвечивания (восстановление метиленового синего) и регистрировали время, затраченеє на этот процесс. Сопоставляя время, затраченное на восстановление метиленового синего в каждом го разведстшй образцов серий вакцины с показателями концентрации живых бруцелл в зтттх же образцах, установленным бактсриололгческим методом, нами была состояла«л таблица определения количества живых бруцелл в вакцине из пгт. 19 и 82 (таблица 4) и построены калибровочные графики (рис. IX позволяющие определять кон-цстрдцию живых бруцелл в 1 см3.
После статистической обработан подучемлх результатов были откорректированы дія каждого цпамма константы обесцвечивания менисковою синего в зависимости от концентрации живых бруцелл в испытуемых образцах по ферментативной авгтявности.
Константа обесцвечивания для пгт. 19 состалдвет 2162 ± 10 и для шт.82 - 2817*7.
Количество микробных клеток бруцелл (млрд'мл) можем определять по формуле*. N - a х 1Л
N • количество микробных клеток
a - константа обесцвечивания
I - время обесцвечивания метиленового синего.
Заключение: Предложенная вами модификация биохимическою метода определения количества живых микробных клеток может использоваться в практической работе наравне с бактериологическим
- Київ+380960830922