2
ОГЛАВЛЕНИЕ
Стр.
ВВЕДЕНИЕ....................................................................5
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.........................................................9
1.1. Общие сведения о ящуре.................................................9
1.2. Общие принципы профилактики и ликвидации ящура........................11
1.2.1. Методы лабораторной диагностики ящура...............................11
1.2.2. Установление антигенного родства различных штаммов вируса
ящура методом РСК....................................................15
1.2.3. Меры борьбы и специфическая профилактика ящура......................17
1.3. Эпизоотическая ситуация по ящуру......................................21
1.3.1. Эпизоотическая ситуация в мире за период с 1996 по 2000 гг..........21
1.3.2. Эпизоотическая ситуация в странах СНГ...............................25
1.4. Программы искоренения ящура в европейских странах.....................28
1.5. Создание буферной зоны по ящуру в странах СНГ.........................33
1.6. Заключение............................................................38
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ................................................39
2.1. Материалы и методы....................................................39
2.1.1. Вирусный материал, культуры клеток, питательные среды...............39
2.1.2. Исследуемые сыворотки крови.........................................40
2.1.3. Серологические реакции, применяемые в работе........................41
2.1.4. Получение гипериммунных сывороток крови.............................42
2.1.5. Статистическая обработка полученных результатов.....................43
2.2. Результаты исследований...............................................44
2.2.1. Эпизоогодогическни мониторинг по ящуру в Закавказье.................44
2.2.1.1. Грузия............................................................45
2.2.1.2. Азербайджан.......................................................48
2.2.1.2.1. Нахичеванская АО................................................50
2.2.1.3. Армения...........................................................52
2.2.1.3.1. Нагорный Карабах................................................54
2.2.2. Изучение антигенного родства штаммов вируса ящура типов А, О,
Азия-1, выделенных в различные годы на территории бывшего СССР и буферной зоны стран СНГ, а также полученных из ВСЛ.......54
2.2.2.1. Изучение антигенного родства серотипов типа А методом РСК....54
2.2.2.2. Изучение антигенного родства серотипов типа 0................56
2.2.2.3. Изучение антигенного родства серотипов типа Азия-1...........59
2.2.3. Серомониторинг но ящуру в РФ и странах СНГ.....................61
2.2.3.1. Стандартизация методов исследований иротивоящуриых антител в ИФА
и РМН в соответствии с требованиями МЭБ.........................61
2.2.3.2. Обнаружение антител к структурным полипептидам вируса ящура..63
2.2.3.2.1. Серомониторинг в Армении...................................64
2.2.3.2.2. Серомониторинг в Грузии....................................66
2.2.3.2.3. Серомониторинг в Азербайджане..............................68
2.2.3.2.4. Серомониторинг в РФ........................................69
2.2.3.3. Выявление антител к неструктурным полипептидам вируса ящура..70
2.2.4. Разработка проекта основных мероприятий по профилактике п борьбе с ящуром для стран Закавказскою региона.................................81
2.2.5. Разработка унифицированной инструкции (правил) по профилактике и борьбе с ящуром применительно к современной ситуации..................84
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.............................................87
4. ВЫВОДЫ.............................................................102
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ...........................................103
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ..................................................105
7. ПРИЛОЖЕНИЯ.........................................................120
и
зарегистрирована генерализованная форма ящура, а у 17,2 % - только местный процесс (45).
7.2. Общие принпипы профилактики и ликвидации ящура
1.2.1. Методы лабораторной диагностики ящура
ß зависимости от конкретных условий диагностика может осуществляться двумя принципиально отличающимися приемами. В основе первого направления, именуемого прямой диагностикой, лежат приемы прямою выделения и идентификации •этиологического фактора или его структурных антигенов; в основе второго направления, именуемого ретроспективной диагностикой, являются приемы выявления специфических антител, появляющихся как следствие иммунных реакций организма на внедрение патогенного агента.
Методы лабораторной диагностики ящура варьируют также в зависимости от того, необходимо ли раннее обнаружение и идентификация специфических противоящурных антител (АТ) у больных животных или у рекоивалесцеитов (96).
Для биопробы используют мышат-сосунов 4-6-дневного возраста, морских свинок, массой не менее 500 г и первичную культуру клеток почек телят, поросят, ягнят, щитовидной железы КРС и перевиваемые клетки - ВНК-21,1B-RS-2 (155, 53).
Морские свинки легко заражаются при интрадермальном введении вируссодержащего материала в плантарную поверхность задних лапок методом тунелирования в дозе 0,2 - 0,5 мл. Заражают не менее 5 голов. Первичные поражения обычно появляются через 2-5 дней (по мере созревания афт). Вторичные поражения -везикулы в ротовой полости и на конечностях - обычно развиваются при заражении штаммами, адаптированными к морским свинкам (69).
Для выделения вируса чаще всего используют культуру первично-трипсинизированных клеток почек свиней или телят. Наблюдение за инфицированными культурами клеток ведут 7 дней, микроскопируя их ежедневно. Специфическая дегенерация клеток при подтверждении ее специфичности в РСК свидетельствует о наличии В Я в испытуемом материале.
Эффективность выделения вируса из патологического материала повышается при использовании методов очистки и концентрирования вируссодержащих суспензий.
Благодаря удобству выполнения, экономичности, а главное, возможности быстрого получения результатов, позволяющих одновременно определить типовую и вариантную принадлежность эпизоотического вируса, чаще всего применяют РСК, РДСК, ИФА (68, 75).
Реакция связывания комплемента (РСК)
РСК является наиболее распространенным серологическим методом идентификации штаммов различных вирусов, выполняемым в различных модификациях.
Механизм реакции состоит из двух этапов: на первом участвуют антигены (АГ) и АТ (один из них заранее известен), а также комплемент морской свинки. При условии комплементарности Аг и Ат их комплекс связывает комплемент, что выявляют на втором этапе с помощью индикаторной системы (смесь эритроцитов барана и антисыворотки к ним). Если комплемент связался с комплексом Аг - Ат, то не происходит лизиса эритроцитов (положительная реакция). При отрицательной реакции несвязанный комплемент способствует гемолизу, по которому судят о результатах реакции (57).
Используют РСК по 100 и 50 % - ному гемолизу. (56)
Иммуноферментный анализ (ИФА)
Более перспективным но сравнению с РСК был признан ИФА - как новое направление иммунохимии. Сочетание высокой специфичности АТ и активности ферментов позволяет определять различные соединения в концентрациях от 10 й до 10'12 г/мл (18).
Однако на заседании Постоянного технического комитета Европейской комиссии по борьбе с ящуром (ЕКЯ) отмечалось, что, несмотря на более высокую чувствительность, при проверке полевых материалов ИФА дает такие же результаты, как и РСК (128, 68).
Как и классические серологические реакции, этот метод основан на взаимодействии АГ и АТ, но реакция между ними протекает не во всем объеме реакционной смеси, а на поверхности носителя (твердой фазе).
- Київ+380960830922