2
СОДЕРЖАНИЕ
Стр
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ................................................... 4
ВВЕДЕНИЕ............................................................ 5
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ................................................... 11
1. Характеристика инфекционного ринотрахеита - пустулезного
вульвовагинита крупного рогатого скота (ИРТ-ИПВ КРС) 11
2. Особенности клинического проявления ИРТ КРС и значение
латентно инфицированных быков-производителей в распространении заболевания........................ 13
3. Родственные связи вируса ИРТ КРС с вирусами семейства
Воутае..................................................... 17
4. Структура и функционирование генома вируса ИРТ
КРС........................................................ 19
5. Разработка и применение метода полимеразной цепной реакции
(ПЦР) для выявления вируса ИРТ КРС......................... 22
6. Заключение по обзору литературы............................. 30
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ............................................ 32
1. Материалы и методы.......................................... 32
2. Результаты исследований..................................... 38
2.1. Разработка ПЦР для выявления ДНК вируса ИРТ КРС 38
2.1.1. Подбор праймеров для постановки ПЦР......................... 38
2.1.2. Компоненты ПЦР.............................................. 38
2.1.3. Отработка оптимального режима амплификации.................. 39
2.2. Определение чувствительности и специфичности ПЦР с
праймерами на ген тимидинкиназы............................ 40
2.3. Тестирование при помощи ПЦР референтных штаммов и
изолятов вируса ИРТ КРС, выделенных на территории РФ и типированных в реакции нейтрализации....................... 42
3
2.4. Эффективность ПЦР при выявлении ДНК вируса ИРТ КРС 45
2.4.1. Сравнительная эффективность различных методов выявления вируса ИРТ КРС при исследовании проб биоматериала от животных разных половозрастных групп............... 45
2.4.2. Эффективность ПЦР при выявлении ДИК вируса ИРТ КРС в пробах биоматериала от больных телят................... 47
2.4.3. Эффективность ПЦР при выявлении ДНК вируса ИРТ КРС в пробах биоматериала от коров........................... 50
2.4.4. Эффективность ПЦР при выявлении ДНК вируса ИРТ КРС в сперме быков-производителей............................ 53
2.4.4.1 Определение чувствительности ПЦР при исследовании искусственно контаминированной вирусом спермы быков-производителей..................................... 53
2.4.4.2 Сравнительное изучение эффективности ПЦР при диагностике заболевания ИРТ-ИПВ у быков-производителей............. 54
2.5. Степень контаминации вирусом ИРТ КРС банков спермы на племпредприятиях, установленная с помощью ПЦР 58
2.6. Генотипирование изолятов вируса ИРТ КРС, выделенных из спермы быков-производителей, с помощью ПЦР-ПДРФ анализа 61
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ............................. 66
ВЫВОДЫ........................................................ 79
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ................................ 81
ЛИТЕРАТУРА............................................ 82
ПРИЛОЖЕНИЕ.................................................... 106
10
собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы, приложения. Работа иллюстрирована 4 рисунками и 12 таблицами. Список литературы включает 209 источников, в том числе 153 зарубежных.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Результаты разработки и сравнительной диагностической эффективности полимеразной цепной реакции (ПЦР) при ИРТ КРС.
2. Результаты изучения степени контаминации банков спермы, полученной от инфицированных быков на племпредприятиях Сибири, а также генотипирования выделенных изолятов вируса.
11
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Характеристика инфекционного ринотрахеита - пустулезного вульвовагинита крупного рогатого скота (ИРТ-ИПВ КРС)
Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота (ИРТ КРС); инфекционный пустулезный вульвовагинит (ИПВ КРС); некротический ринотрахеит; «красный нос»; пузырьковая сыпь; инфекционный катар верхних дыхательных путей - широко распространенное контагиозное заболевание крупного рогатого скота, вызываемое герпесвирусом КРС первого типа (Bovine Herpes Virus-1; BHV-1). Основными клиническими формами заболевания являются респираторный синдром (ИРТ) и пустулезный вульвовагинит - баланопостит (ИПВ). Заболевание проявляется в виде поражений респираторного тракта, вульвовагинитов, маститов и абортов у коров, баланопоститов у быков, конъюнктивитов, менингоэнцефалитов, реже артритов, поражений желудочно-кишечного тракта и генерализованной инфекции у телят.
ИПВ КРС официально регистрировался в Германии с 1909 г. (О.С. Stroub, 1978). Rohlwes в 1838 г. (C. Niewohner, 1990) впервые описал клиническую картину ИПВ КРС (под названием «везикулярная сыпь»). Подобное заболевание описано в 1895 г. Steddom (J.W. Kendrik, 1958).
Впервые ИРТ КРС описали R.J. Schroeder и D.M. Moys (1954) в США, штат Калифорния. N.J. Myller (1954) установил в 1940 г. в штате Колорадо подобное заболевание, которое он назвал «некротический ринотрахеит». Из этого можно заключить, что ИПВ КРС существовал до ИРТ как в Европе, так и в США (О.С. Stroub, 1975).
Вирус ИРТ КРС впервые был выделен и идентифицирован в культуре клеток S.H. Madin et al. (1956) из носовых истечений телят с клиническими признаками респираторных заболеваний. В 1958 году вирус был выделен из
- Київ+380960830922