2
ОГЛАВЛЕНИЕ
Стр.
ВВЕДЕНИЕ.......................................................... 7
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.............................................. 12
1.1. Историческая справка...................................... 12
1.2. Характеристика вируса ИББ................................. 13
1.2.1. Таксономическое положение........................... 13
1.2.2. Морфология и химический состав...................... 15
1.2.3. Антигенная структура и вариабельность............... 19
1.2.4. Устойчивость...................................... 21
1.2.5. Культивирование..................................... 23
1.3. Эпизоотические особенности ИББ............................ 26
1.4. Клинические признаки ИББ.................................. 27
1.5. Патологоанатомические и гистологические изменения......... 28
1.6. Методы диагностики........................................ 30
1.6.1. Выделение и идентификация вируса, обнаружение ви- 31
русного генома......................................
1.6.2. Серологические методы обнаружения антител и антигена 33
вируса ИББ..........................................
1.7. Иммунитет и профилактика ................................. 37
1.7.1. Особенности и проблемы специфической профилактики 37
ИББ.................................................
1.7.2. Живые вирусвакцины против ИББ....................... 41
1.7.2.1. Вакцины из «мягких» и «промежуточных» 42
штаммов......................................
1.7.2.2. Вакцины из «жестких» штаммов................ 46
1.7.3. Инактивированные вакцины............................ 48
1.7.4. Новые направления в иммунопрофилактике ИББ.......... 50
1.8. Заключение по обзору литературы........................... 51
3
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ......................................... 54
2.1. Материалы и методы........................................... 54
2.2. Результаты исследований...................................... 68
2.2.1. Сравнительное изучение иммунобиологических свойств 68
вакцинных штаммов вируса ИББ.........................
2.2.1.1. Репродукция в эмбрионах птиц..................... 68
2.2.1.2. Репродукция в культурах клеток................ 71
2.2.1.3. Определение реверсибельности и безвредности 74
2.2.1.4. Изучение иммуносупрессивного действия 77
штаммов.......................................
2.2.1.5. Стабильность иммунобиологических свойств 78
штаммов.......................................
2.2.1.6. Антигенная активность ........................... 79
2.2.1.7. Иммуногенность................................... 80
2.2.2. Структура и морфология штамма «\Vinterficld 2512» 84
ВИББ.................................................
2.2.3. Нуклеотидное секвенирование генома................... 85
2.2.4. Разработка технологии изготовления, контроля и схемы 88
применения вакцины против ИББ из штамма «Винтер-филд».................................................
2.2.4.1. Изучение параметров промышленного культиви- 88
рования.......................................
2.2.4.2. Отработка методов стабилизации и лиофилизации 94
2.2.4.3. Длительность хранения............................ 97
2.2.5. Изучение свойств опытных серий вакцины................. 101
2.2.5.1. Определение иммунизирующей дозы................. 101
2.2.5.2. Безвредность.................................... 102
2.2.5.3. Антигенная активность, иммуногенность, сроки на- 103
ступления иммунитета.............................
16
свойств вирусов с двумя сегментами двухцепочечной РНК были даны Dobos с соавторами [129]. Морфологические особенности вируса ИББ были изучены Nick. [253], Hirai с соавторами [170, 171, 173] с использованием электронной микроскопии.
Морфология. Вирионы бирнавирусов лишены внешней оболочки, имеют икосаэдрический капсид диаметром 60 нм, состоящий примерно из 132 морфологических субъединиц [116, 129].
Детальное изучение вируса ИББ с использованием электронной криомикроскопии в сочетании с компьютерной обработкой изображения позволило составить трехмерную каргу вируса с разрешением 2 нм. [82]. Было установлено, что икосаэдрический капсид вируса, общая толщина которого составляет 9 нм, имеет Т=13 симметрию. Субъединицы сгруппированы в тримеры. На внешней поверхности вирусного капсида (радиус 31-33 нм) тримеры образуют треугольные выступы на осях 3 порядка. На внутренней поверхности тримеры имеют Y-образную форму и тесно упакованы, формируя непрерывную оболочку.
Расчетная модель предполагает, что вирион имеет несколько осей симметрии (2, 3 и 5 порядков). Внешняя часть вирусного капсида (в пределах радиуса 29-33 нм) с выдающимися наружу выступами, вероятно, сформирована вирусным протеином, обозначенным VP2. На внутренней поверхности капсида (радиус 26-28 нм) Y-образные формы могут быть образованы белком VP3, основная область которого обращена вовнутрь и связана с упакованной дцРИК. Белок VP4 локализуется на внутренней поверхности капсида вокруг осей 5 порядка. Эта модель предполагает наличие 780 копий VP2, 600 копий VP3, и 60 копий VP4, что согласуется с процентным содержанием вирусных белков.
Физико-химические свойства. Hirai с соавт. [171, 173] выделяли вирус ИББ из фабрициевых сумок инфицированных цыплят. После очистки методом центрифугирования в градиенте плотности хлористого цезия было показано,
17
что основная вирусная фракция имела плавучую плотность 1,34 г/см3 и содержала вирусные частицы гексагональной формы с диаметром 55-65 нм.
Аналогичные результаты были получены другими исследователями [77, 143, 237]. Было отмечено, что плотность в градиенте хлористого цезия незрелых вирусных частиц ниже 1,33 г/см3 [187, 89, 265].
Muller и Becht [237] исследовали 4 вирусных фракции с использованием электронной микроскопии и электрофореза в ПААГе. Было обнаружено, что фракция с плотностью 1,33 г/см3 содержит внешне типичные частицы вируса ИББ. Плотность 1,32 г/см имели неполные вирусные частицы с относительно малым содержанием дцРНК. Третью фракцию с плотностью 1,31 г/см3 представляли вирусные частицы, не содержащие дцРНК. Полипептидный состав всех трех фракций был сходным. Четвертая фракция с плотностью 1,29 г/см' содержала частицы неправильной формы с проникшим внутрь красителем, в основном, почти без дцРНК и с отличающимся полипептидным составом. Этот тип неполных вирусных частиц был выявлен в инфицированных вирусом ИББ фибробластах куриных эмбрионов (ФЭК) [237].
Поскольку В-лимфоциты являются основным местом репликации вируса ИББ, частицы с низкой плотностью, сформированные в инфицированных клетках фабрициевых сумок, вероятно, не полностью собраны, в отличие от неполных частиц из ФЭК, которые имели измененный (уменьшенный) полипептидный состав. По всей видимости, пассирование вируса на культуре ФЭК с высокой дозой заражения приводит к образованию большого количества незрелых вирусных частиц [196].
Белки. На основании обобщенных данных установлено, что вирионы бирнавирусов содержат пять белков: VP1 (94 кДа), который является РНК-зависимой РНК-полимеразой и взаимодействует с сегментами генома. Dobos с соавт. [129] показали, что VP1 связан с концами обоих геномных сегментов. О VPX (62 кДа) известно, что он является предшественником VP2. Основными структурными компонентами вирусного капсида являются VP2 и VP3. Белок
- Київ+380960830922