2
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ......................................................... 4
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ................................................. 9
1.1. Е.песгорИогит и его роль в этиологии заболеваний конечностей животных.................................................................. 9
1.2. Характеристика культурально-биохимических свойств возбудителя некробактериоза.......................................................... 12
1.3. Факторы патогенности и сохраняемость возбудителя
некробактериоза во внешней среде......................................... 17
1.4. Вопросы культуральной изменчивости свойств возбудителя 2некробактериоза, характеристика биоваров и серовариантная неоднородност ь штаммов Е.песгор1югит.................................................... 22
1.5. Методы стабилизации свойств микроорганизмов - возбудителей заболеваний животных..................................................... 27
1.6. Методы контроля иммуногенной активности биологических препаратов............................................................... 39
1.7. Краткое заключение по обзору литературы....................... 46
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ........................................ 48
2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ............................................ 48
2.1.1. Штаммы Е песгорЬогит, их паспортная характеристика и способы поддержания...................................................... 47
2.1.2. Питательные среды для поддержания штаммов /\песгорИогит. ... 49
2.1.3. Методы получения антигенов и сывороток для постановки серологических реакций................................................... 51
2.1.4. Методы и техника лиофилшации некробактерий.................. 54
2.1.4.1. Подготовка штаммов Е.песгорЬюгит к высушиванию и сушка.... 54
2.1.4.2. Методы определения количества клеток в материале.......... 55
2.1.5. Методы контроля вакцин против некробактериоза............... 58
2.1.5.1. Способы получения экзо- и эндотоксинов бактерий некроза 58
2.1.5.2. Техника постановки реакции нейтраиизации.................. 60
2.1.6. Статистический анализ полученных результатов................ 61
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ........................................ 63
2.2.1. Схема подготовки штаммов Р.песгорЬогшп для промышленного изготовления вакцин против некробакгсриоза животных................. 63
2.2.1.1. Изучение факторов, вызывающих полиморфизм и Ь-трансформацию некробакгерий.............................................. 64
2.2.1.2. Гипирование Р.песгорЬогшп по культурально-биологическим признакам................................................................ 68
2.2.1.3. Изучение серовариантной принадлежности штаммов Р.песгорЬогшп и значение био- и ссроваров при изготовлении вакцин...... 72
2.2.2. Совершенен вование способа лнофнлизацни производственных штаммов бакгерин некроза................................................. 79
2.2.2.1. Методы определения количества живых клеток в материале 79
2.2.2.2. Влияние условий хранения и длительности интервалов между пересевами на концентрацию живых клеток в культурах Р.песгорЬогшп........ 91
2.2.2.3. Испытание некоторых сред высушивания для стабилизации свойств Р.песгорЬогшп............................................ 95
2.2.2.4. Определение оптимальной концентрации клеток некробакгерий присушке................................................................ 104
2.2.3. Совершенствование метода контроля специфической активности вакцины против некробактерноза животных. 106
2.2.3.1. Получение токсина Р.песгорЬогшп и определение его заражающей дозы ................................................. 108
2.2.3.2. Подбор иммунизирующих доз вакцины и заражающих доз вирулентного штамма (токсина) при контроле специфической активности вакцины против некробакгсриоза.......................................... 111
3. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ............................. 113
4. ВЫВОДЫ........................................................ 123
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
124
14
Биохимические свойства возбудителя некробактериоза Клетки любых микроорганизмов находятся в постоянном контакте со средой обитания и подвергаются воздействию разнообразных физикохимических и биологических факторов. Все обменные процессы, происходящие между клетками микроорганизмов и окружающей средой, сопровождаются или поглощением или выделением тепла (51).
Гак, Ь.НаИтапп (192) отмечает, что при культивировании бактерий на искусственной питательной среде происходят сложные процессы обмена веществ. При этом с одной стороны наблюдаются интенсивные процессы диссимиляции - ферментативное разрушение питательных веществ, имеющихся в культуральной среде (белки, углеводы и др.), а с другой стороны ассимиляция, то есть превращение полученных продуктов в высокомолекулярные вещества, уже специфически свойственные данному организму.
Потребность в питательных веществах различна не только у разных видов бактерий, но она достаточно широко может варьировать и в пределах одного вида (58,166).
Теория азотного питания бактерий претерпела те же изменения, что и теория азотного питания животных. Оказалось, что как в первом, так и во втором случае используются не сами белки, а входящие в их состав аминокислоты (23) и в первую очередь незаменимые аминокислоты.
Установлено, что аминокислоты влияют на рост и развитие микроорганизмов, стимулируя или подавляя ею. Известно, что аминокислоты обладают мутагенным действием, доказано участие аминокислот в синтезе биологически активных продуктов, а также веществ небелковой природы, продуцируемых микроорганизмами (118).
Значительное влияние на потребление бактериями отдельных аминокислот оказывает наличие в среде источников энергии и витаминов(205).
15
Бактерии, извлекающие азот из сложных белковых соединений, предварительно гидролизуют их с помощью собственных ферментных систем па более простые соединения и в дальнейшем до аминокислот, т.к. молекулы белка и крупные фрагменты полипептидов не могут проникать внутрь бактерийной клетки (146). В бактериальную клетку проникают вещества, имеющие размер молекул не более 18 А0, к ним относятся аминокислоты и пептиды, состоящие из двух, трех аминокислот, имеющие молекулярную массу не более 120.
Гидролиз белковых субстратов осуществляется при помощи протеолитических ферментов, выделяемых микробной клеткой. Г.песгорЬогит выделяет амилазу, липазу, прогеазу, целлюлазу и другие специфические эктопротеазы. Относительно способности бактерий некроза разлагать белковые субстраты существуют различные мнения. Большинство исследователей считает, что протеолитические способности их выражены слабо. Хотя многие исследователи выявили различную способность этих бактерий расщеплять ткань сухожилий разных видов животных (56,60,92,95).
Эктопротеазы образуются на ранних этапах развития культур. Помимо эктопротеаз у бактерий имеются внутриклеточные протеазы. На более поздних этапах развития бактерий в среде появляются пептидазы, вызывающие глубокий гидролиз образовавшихся пептидов.
Продукты распада белковых молекул в дальнейшем легко поддаются разрушающему действию ферментов возбудителя некробактериоза с выделением аммиака, а серусодержащие соединения разлагаются с выделением сероводорода.
В результате последовательною воздействия протеаз и пептидаз происходит расщепление белка с образованием аминокислот, используемых далее аминогетеротрофными бактериями, к которым относятся и Г.песгорЬогит, для синтеза собственных соматических белков (23).
11аразитизм привел к ограничению синтетических функции патогенных микроорганизмов и обусловил потребность их в готовых аминокислотах.
- Київ+380960830922