2
СГІИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ
ВБИ - вирус болезни Ибараки
ВБ - вирус блютанга
ВЭГБО - вирус эпизоотической геморрагической болезни оленей
ГА - гемагглютинирующий антиген
гпх - гельпроникающая хроматография
ИАЖ - иммуноасцитическая жидкость
ИН - индекс нейтрализации
ИЭФ - иммуноэлектрофорез
КРС - крупный рогатый скот
КЛО - катаральная лихорадка овец
МА - моноклональные антитела
мдвк - почка теленка
мг - мышечный гидролизат
МЕМ - минимальная среда ИГЛА
млд - мышиная летальная доза
МФА - метод флюоресцирующих антител
нтд - нормативно-техническая документация
ОП - оптическая плотность
ПС -почка сайги
ПС1ТС - почка сибирского горного козерога <
ПЭАК - почка эмбриона африканской козы.
ПЭЛ - почка эмбриона лося
РГА - реакция гемагглютинации
РДП - реакция диффузионной преципитации
РЗГА - реакция задержки гемагглютинации
PH - реакция нейтрализации
РНК - рибонуклеиновая кислота
РСК - реакция связывания комплимента
РТГА - реакция торможения гемагглютинации
ТФ ИФА - твердофазный иммуноферментный анализ
тцд - цитопатогенных доз
ЦПД - цитопатическое действие
ФБР - фосфатный буферный раствор
ЭМИ - электронно-микроскопические исследования
СУ-1 - почка зеленой мартышки
УР - вирусный протеин
Ш - неструктурный протеин
3
Оглавление
1. Введение........................................................5
1.1. Актуальность темы...................................................5
1.2. Цель и задачи исследования..........................................7
1.3. Научная новизна.....................................................7
1.4. Практическая значимость и реализация результатов исследования 8
1.5. Апробация работы....................................................8
] .6. Публикации..........................................................8
1.7. Основные положения диссертационной работы,
выдвигаемые на защиту..............................................9
2. Обзор литературы................................................9
2.1. Краткая характеристика эпизоотической
геморрагической болезни оленей.....................................9
2.2. Морфология и физико-химическая характеристика вируса ЭГБО 11
2.3. Распространение ЭГБО в мире........................................18
2.4. Другие серогруппы рода Орбивирусов.................................20
2.5. Методы диагностики, вирусологического и
серологического мониторинга ЭГБО..................................22
3. Собственные исследования.......................................30
3.1. Материалы..........................................................30
3.1.1. Вирусы.........................................................30
3.1.2. Животные.......................................................30
3.1.3. Культуры клеток................................................31
3.1.4. Питательные среды..............................................31
3.1.5. Сыворотки......................................................31
3.1.6. Реактивы, использованные в работе..............................32
3.1.7. Оборудование...................................................33
3.2. Методы.............................................................33
3.2.1. Инфицирование культур клеток, получение
и титрование вируссодержащего материала.......................33
3.2.2. Серологические методы исследования.............................34
3.2.3. Искусственное заражение животных...............................35
3.2.4. Электронная микроскопия........................................35
3.2.5. Статистические методы исследования.............................36
3.2.6. Метод эпизоотологического исследования.........................36
3.3. Результаты собственных исследований................................36
3.3.1. Определение восприимчивости некоторых видов жвачных, обитающих на территории РФ, к
заражению вирусом ЭГБО........................................36
33.1.1. Изучение клинических особенностей течения ЭГБО
у благородного оленя........................................37
3.3.1.2. Изучение клинических особенностей течения ЭГБО у овец....41
3.3.1.3. Изучение клинических особенностей течения ЭГБО у КРС....44
10
Вирус вызывает сильные дегенеративные изменения в эпителиальных клетках, что приводит к периваскулярным тромбозам. Вирус ЭГБО размножается в цитоплазме эндотелия и периваскулярных клетках (114).
Вирус эпизоотической геморрагической болезни оленей не вызывает клинической картины болезни у овец, крупного рогатого скота, коз и других представителей семейства оленевых, обитающих вместе с белохвостыми оленями (109, 52).Однако у овец наблюдали виремию длите.ггыюстью 3-12 дней, недомогание, гиперемию кожи и слизистых оболочек; лихорадку, длящуюся 1-3 дня с последующим полным выздоровлением (7). У крупного рогатого скота болезнь трудно клинически отличить от блютанга и ее всегда следует подтверждать результатами лабораторных исследований (86).
Наиболее восприимчивы к вирусу белохвостые олени в возрасте от 10 недель до 2 лет. Болезнь легко воспроизводится введением им 3- 4 мл надосадоч-ной жидкости, приготовленной из 10% суспензии селезенки или крови от больных или павших животных. У оленей на 5-8 сутки после экспериментального заражения развивается болезнь, клинически идентичная естественному течению, с гибелью через 1-2 суток после начала болезни. При использовании фильтрата надосадочной вируссодержащей жидкости течение заболевания удлиняется до 11-14 и более суток, и не всегда возможна гибель животных (90).
ЭГБО не передаётся при контакте. Сезонные и географические особенности проявления заболевания предполагают тесную связь возникновения болезни с климатическими условиями, и, следовательно, возможность существования артроподного вектора. Резервуаром вируса в природе служат популяции диких животных, находящиеся в тесной связи с беспозвоночными переносчиками. Переносчиками служат мокрецы из рода Си11со1с1ев ( 14, 19, 22, 39, 51, 61, 78, 83, 88,91, 109).
11
2.2. Морфология и физико-химическая характеристика вируса ЭГБО
Вирус ЭГБО классифицирован как член рода Орбивирусов, семейства Яеоуігісіае. Он имеет морфологию, типичную для орбивирусов, а вирусная частица состоит из двойного капсида, содержащего 10 двунитчатых сегментов РЖ. Каждый сегмент генома кодирует синтез вирусоспецифических белков. Вирио-ны состоят из нуклеотида гексагональной формы, то есть имеют кубический тип симметрии и состоят из 32 капсомеров. Капсомер диаметром 12 нм состоит из 5-6 субъединиц. Вирион не имеет липопротеиновой оболочки имеет диаметр от 50 до 65 нм. Температура плавления РЖ составляет 86°С (54, 55, 57, 112, 114, 116).
Таблица 1
Молекулярный вес сегментов РЖ вируса ЭГБО (килодальтон) (167)
Сегмент 1 -I2 3 4 5 6 7+8 9 10
I шт.Ныо-Джерси 2,57 1 1,99 1,88 1,29 1,16 1,07 0,60 0,56 0,32
[ шт. Альберта 2,54 11,91 1,88 1,25 1,16 1,10 0,59 0,57 0,33
Сумарный вес сегментов РЖ для 1 серотииа (шт.Нью-Джерси) составил 11,44 кД, для 2 серотипа (шт. Альберта) -11,33 кД.
Название рода происходит от характерной кольцеобразной структуры, видимой на поверхности внутреннего капсида (от латинского “orbis” - кольцо). Морфологические характеристики этих трех членов семейства Reovindae детально изложены в обзоре Venvoerd, Huismans, Erasmus (119,121).
Вирус размножается в клетках с латентным периодом в 4 часа. Очень быстро подавляет синтез белков клетки хозяина. После адсорбции и проникновения вирус появляется в эндосомах. Именно здесь происходит раздевание вирионов. Для инициации транскрипции генома необходимо удаление белков наружного капсида, что активирует вирионную транскриптазу. Этот процесс зависит от ионов Mg2 и температурного оптимума (28°С). Для вируса ЭГБО характерно соответствие между мРЖ и геномными фрагментами. При транскрип-
- Київ+380960830922