2
Содержание
стр.
ВВЕДЕНИЕ.......................................................... 5
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ............................................. 10
1.1. Возбудитель болезни Ауески и его характеристика........... 10
1.2. Технология изготовления вакцин при болезни Ауески......... 16
1.3. Вакцины и вакцинопрофилактика при болезни Ауески.......... 23
1.4. Иммунитет при болезни Ауески.............................. 35
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ....................................... 38
2.1. Материалы................................................. 38
2.2. Методы исследований....................................... 39
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ............................ 42
3.1 Получение радиоинактивированного вируса болезни Ауески 42
3.1.1. Определение спектра чувствительности культур клеток к вирусу болезни Ауески........................................... 42
3.1.2. Подбор оптимальной системы культивирования вируса болезни Ауески.......................................................... 48
3.1.3. Разработка способа инактивации вируса болезни Ауески 53
3.1.3.1. Определение режимов радиоинактивации вируса болезни Ауески.......................................................... 53
3.1.3.2. Проверка полноты инактивации вируса...................... 58
3.2. Изучение иммунобиологической активности радио-инактивированного вируса болезни Ауески......................... 60
3.2.1. Определение безвредности радиоинактивированного вируса ... 60
3.2.2. Определение антигенной активности радиоинактивированного вируса.......................................................... 61
3.2.3. Оценка влияния инактиваторов на антигенную активность вируса болезни Ауески........................................... 63
3
3.2.4. Определение иммуногенной активности радиоинактивирован-ного антигена на белых крысах................................. 64
3.2.5. Определение иммуногенной активности радиоинактивирован-ного антигена на кроликах..................................... 66
3.2.6. Определение иммуногенной активности радиоинактивирован-ного антигена на овцах........................................ 67
3.2.7. Подбор качественного иммуностимулятора для повышения иммуногенности вакцины..................................... 71
3.2.8. Определение оптимальной дозы инактивированной вакцины.... 75
3.2.9. Определение способа введения инактивированной вакцины 77
3.2.10. Определение сроков реиммунизации...................... 79
3.3. Определение эффективности инактивированной вакцины....... 84
3.4. Изучение стабильности иммуногенных свойств вакцины в процессе хранения............................................. 90
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ........................ 92
5. ВЫВОДЫ.................................................... 102
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.................................. 104
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ......................................... 105
8. ПРИЛОЖЕНИЯ................................................ 133
В это подсемейство входит род Simplex virus (вирус простого герпеса 1 и вирус простого герпеса 2, вирус маммилита крупного рогатого скота) и род Varicellovirus (вирус болезни Ауески, вирус ветряной оспы/опоясывающего лишая и вирус герпеса лошадей типа 1) (Бакулов И.А. и др., 1985).В настоящее время известен только один серотип ВБА (Mettenleiter Т С. , 1991.)
Как и все другие герпесвирусы, вирион болезни Ауески состоит из четырех структурных компонентов: ядра (сердцевины), калсида;
асимметрично распределенного вокруг капсида тегумента; и оболочки. Оболочка вируса содержит многочисленные выступы - «шипы» (пепломеры). Размер вириона колеблется от 150 до 180 нм, размер нуклеокапсида - 105-110 нм. Эти вариации частично обусловлены разной толщиной тегумента - аморфного вещества белковой природы (Ройзман Б., 1989, Mettenleiter Т.С., 1991; Gustafson P.D., 1970; Wittman G. et. al., 1989, Ben-Porat T. et.al ., 1985)
Геном вируса представлен 2 - спиральной линейной ДНК с молекулярной массой 145 кД. Плавучая плотность вирионов в градиенте хлористого цезия - 1,27 - 1,29 г/см5, константа седиментации 540 S.
По химическому составу вирус содержит 70% белка, 6,5% ДНК, 22% фосфолипидов, 15% углеводов. Суммарное содержание гуанина и цитозина в вирусной ДНК составляет 74%. В составе ДНК содержится: аденина 13,2%; гуанина 37,0%, цитозина 36,6%; тимина 13,6%. Нуклеотид вириона выполняет роль носителя генетической информации (Сергеев В.А., Орлянкин В.Г., 1983).
Вирусы этого рода проходят онтогенетический цикл развития в ядре и цитоплазме клетки. Нуклеокапсид формируется в ядре, а оболочка вириона - преимущественно в цитоплазме, включая и мембранные элементы клетки.
Гликопротеины представляют наиболее охарактеризованную группу белков ВБА. К настоящему времени у ВБА идентифицировано 17
14
гликопротеинов - g В, g С, g Е, g D, g I, g G, g Н, g К, g L, g М и g N (Mettenleiter T.C., 1994). За исключением гликопротеина g G, все гликопротеины ВБА выявляются в мембране вирионов и на мембранах инфицированных клеток. Гликопротеины ВБА участвуют в ключевых событиях репликации вирусов и являются основными индукторами защитного иммунитета (Моренков О С., 2000).
Гликопротеин В является основным компонентом оболочки ВБА (Kost Т А. et. al., 1989, Lukacs et. al., 1985). Вирусы, у которых делегирован ген g В, способны размножаться только в культурах клеток, экспрессирующих g В, который комплементирует делению гена в вирусе (Knopp A. et.al., 1992; Rauh I, 1991). Гликопротеину g В ВБА принадлежит ключевая роль в процессе проникновения генетического материала в клеточную цитоплазму (Pereira L., 1994, Spear P.G., 1993). Гликопротеины g В альфагерпесвирусов играют центральную роль в проявлении синцитиального фенотипа - цитопатического действия вирусов, включающего в себя такие проявления как слияние клеток, образование поликарионов и образование гигантских клеток (Huff et.al., 1988; Регега L., 1994). Гликопротеин g В ВБА играет ключевую роль в распространении вируса от клетки к клетке (Laguerre A et.al., 1998; Nauwynck et.al., 1995; Navarro D. et.al., 1992; Neubauer A., 1997; Peeters P et.al., 1992).
У ВБА, так же как и у остальных альфагерпесвирусов, основным белком, обеспечивающим первичное связывание с клетками является гликопротеин С (Herold B.C. et. al., 1991; Matsuda A. et.al., 1991; Mettenleiter T.C., 1994).
Гликопротеин gC не является жизненно необходимым для репликации вируса (Robins A.K., 1986).
Важнейшей функцией гликопротеина g С является его участие в первичных процессах адсорбции ВБА на мембраны чувствительных клеток
- Київ+380960830922