2
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ........................................................4
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ............................................11
1.1. Этиологические и эпизоотологические особенности коксиеллеза крупного рогатого скота........................................11
1.2. Роль грызунов и клещей: основного резервуара коксиеллеза в природе........................................................22
1.3. Методы лабораторной диагностики коксиеллеза крупного рогатого скота..........................................................26
1.3.1. Серологическая диагностика коксиеллеза крупного рогатого скота........................................................ 27
1.3.1.1. Реакция связывания комплимента........................28
1.3.1.2. Реакция непрямой гемагглютинации......................30
1.3.1.3. Реакция иммунофлуоресценции...........................32
1.4. Заключение................................................36
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ....................................40
2.1.Материалы и методы.........................................40
2.2. Изучение эпизоотической ситуации по коксиеллезу крупного рогатого скота, а также ассоциативным формам ее проявления в хозяйствах Омской области......................................42
2.3. Изучение инфицированности основных переносчиков...........54
2.3.1. Исследование мышеобразных грызунов......................55
2.3.2. Исследование клещей.....................................57
2.4. Морфологические и тинкториальные свойства коксиелл........60
2.5. Серологические методы диагностики коксиеллеза.............61
2.5.1. Получение коксиеллезного антигена и диагностической коксиеллезной антисыворотки для РНИФ...........................61
2.5.1.1. Контроль на чувствительность, специфичность и активность коксиеллезной сыворотки в РНИФ.................................65
з
2.5.1.2. Сравнительное изучение РНИФ и РПИФ при коксисллезе
крупного рогатого скота в производственных условиях........66
2.5.2..Изготовление коксиеллезного эритроцитарного диагностикума для РИГА...............................................................71
2.5.2.1. Изучение специфичности и активности КЭД в РИГА....74
2.5.2.2. Изучение в сравнительном аспекте диагностической ценности
РНИФ и РНГА в производственных условиях....................76
2.6. Постановка биопробы...................................90
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ..................................91
ВЫВОДЫ....................................................100
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ..................................101
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.........................................102
ПРИЛОЖЕНИЕ
13
переходят в стадию покоящихся форм, которые характеризуются уплотнением всех элементов возбудителя, утолщением оболочки его, свертыванием генетического материала. Покоящиеся формы обычно оказываются вне разрушенных клеток хозяина, т. е. в окружающей среде. В последующем они могут быть вновь фагоцитированы другими клетками и вновь начать свой цикл внутриклеточного развития.
У коксиелл антигенными свойствами обладают оболочка, цитоплазма и цельные риккетсии. Однако антигенная активность риккетсий Бернета не является величиной стабильной, как у всех других риккетсий. М. Stoker и Р. Fiset (1956) обратили внимание на изменение антигенной активности американских штаммов риккетсий Бернета в реакции связывания комплемента, которое они назвали фазовой вариацией, или фазовой изменчивостью, что в настоящее время связывается с наличием у коксиелл антигенов I и И фазы. Культура риккетсий, антиген из которых в реакции связывания комплемента выявлял антитела в сыворотках лишь в позднем периоде реконвалесценции, была отнесена к I фазе, а культуры риккетсий, антиген из которых в РСК выявлял антитела в сыворотках как раннего, так и позднего периода реконвалесценции, получил название II фазы (В. Н. Паутов и др., 1968). В организме людей и животных коксиеллы встречаются в фазе I. Под влиянием последовательных пассажей на куриных эмбрионах она превращается в фазу II. В этом случае для возбудителя Ку-лихорадки характерна склонность к спонтанной агглютинации в нормальной сыворотке (R. A. Ormsbee et al, 1964). Возбудитель фазы II хорошо фагоцитируется и при отсутствии антител обладает меньшей вирулентностью по сравнению с фазой I, в которой образует стойкую суспензию, не дает спонтанной агглютинации и не фагоцитируется в отсутствии специфических антител. Обусловлено это тем, что коксиелла Бернета в фазе I имеет поверхностный антиген полисахаридной природы, ответственный за активность. У инфицированных
14
вирулентным возбудителем Ку-лихорадки морских свинок комплементсвязывающие антитела к антигену фазы II появляются через 7-10 дней, к антигену фазы I - значительно позднее (спустя 30-60 суток).
У людей лихорадка Ку развивается после инфицирования несколькими коксиеллами фазы I, а риккетсии фазы II (штамм М-44) даже в 1:106 большей дозе не вызывают каких либо симптомов заболевания (В. Н. Паутов и др., 1968). Итоги применения в 60-80-е годы живой вакцины на основе штамма М-44 свидетельствуют о ее высокой иммунологической эффективности и безвредности, в том числе и при иммунизации людей, в сыворотке которых содержатся специфические антитела (В. В. Михайлов и др., 1996). Другие изоляты чистой фазы II, полученные, в частности, клонированием на культуре клеток, также не переходят в фазу I при выращивании в организме животных. Однако, обладая антигенной структурой фазы II, штамм М-44 содержит в «замаскированном» виде компоненты поверхностного антигена, которые удается выявить при его повторном введении морским свинкам (В. Н. Паутов, 1989).
Коксиеллы обладают поразительной резистентностью во внешней среде, а также к различным физическим и химическим агентам. Они длительно сохраняются в сухом виде и во влажных субстратах, выдерживают солнечный свет, высушивание и относительно высокие температуры. Так, нагревание жидких субстратов, содержащих коксиеллы Бернета, до 60-80°С вызывало гибель возбудителя лишь через 30-60 минут (S. Е. Ransom et al, 1951; Р. И. Зубкова, 1957; В. Ф. Игнатович, 1961). Показана возможность выживания коксислл Бернета в лиофильно высушенных культурах не менее 8-10 лет. На сухой поверхности они сохраняются в течение 15 суток, в высохшей моче и крови зараженных животных — от нескольких недель до полугода, в сухих фекалиях клещей — 586 дней. В водопроводной воде риккетсии
- Київ+380960830922