СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.............................................................5
ГЛАВА 1. ФЕНИБУТ И КИСЛОТА САЛИЦИЛОВАЯ: ФИЗИКО-
ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И МЕТОДЫ АНАЛИЗА. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ...............................................10
1.1. Общая характеристика фенибута и кислоты салициловой............10
1.2. Общая характеристика салифена..................................17
1.3. Методы анализа фенибута и кислоты салициловой..................18
1.3.1. Химические методы анализа фенибута, кислоты салициловой и их некоторых производных....................................................18
1.3.2. Физико-химические методы анализа фенибута, кислоты салициловой и их некоторых производных..........................................22
1.4. Взаимодействие лекарственных веществ...........................25
Выводы по главе 1...................................................26
ГЛАВА 2. ИЗУЧЕНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ФЕНИБУТА И КИСЛОТЫ САЛИЦИЛОВОЙ В САЛИФЕНЕ ............................................28
2.1. Изучение взаимодействия фенибута и кислоты салициловой в салифене термическими методами..........................................28
2.2. Изучение взаимодействия фенибута и кислоты салициловой в салифене спектральными методами.........................................34
Выводы по главе 2...................................................45
ГЛАВА 3. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДЛЯ АНАЛИЗА САЛИФЕНА....................................................46
3.1. Обнаружение у-амино-Р-фенилмасляной кислоты, кислоты салициловой и продуктов деструкции в субстанции салифена с помощью хроматографии в тонком слое сорбента...........................................46
3.1.1. Выбор оптимальной системы растворителей......................46
3.1.2. Выбор оптимального проявителя и установление пределов обнаружения 50
3.1.3. Разработка методик идентификации и контроля чистоты субстанции салифена.......................................................53
9
I
3.2. Качественное и количественное определение салифена и продуктов его деструкции с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии 55
3.2.1. Выбор условий анализа субстанции салифена методом ВЭЖХ............56
3.2.2. Валидация ВЭЖХ методик контроля подлинности, количественного определения и чистоты субстанции салифена...........................62
Выводы по главе 3........................................................76
ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА МЕТОДИК КАЧЕСТВЕННОГО И
КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ САЛИФЕНА.....................................77
4.1. Разработка методик качественного анализа салифена...................77
4.2. Разработка методик количественного определения салифена.............81
4.2.1. Разработка методик количественного определения кислоты салициловой в субстанции салифена.................................................81
4.2.1.1. Выбор условий количественного определения кислоты салициловой в субстанции салифена с помощью обратного броматометрического титрования...............................................................81
4.2.1.2. Выбор условий количественного определения кислоты салициловой в субстанции салифена фотометрическим методом на основе реакции с железа (III) хлоридом....................................................90
4.2.2. Разработка методик количественного определения у-амино-(3-фенилмасляной кислоты в субстанции салифена.......................................93
4.2.2.1. Выбор условий количественного определения у-амино-р-фенилмасляной кислоты с помощью титрования в среде неводного растворителя.............................................................93
4.2.2.2. Выбор условий количественного определения у-амино-р-фенилмасляной кислоты фотометрическим методом на основе реакции с нингидрином............................................................95
4.2.3. Разработка методики количественного определения у-амино-р-фенилмасляной кислоты и кислоты салициловой в одной навеске субстанции салифена................................................................100
3
Предварительные фармакологические испытания салифена проведены на базе Волгоградского государственного медицинского университета. Исследования выполняли на крысах-самцах линии Вистар и мы шах-самцах линии ВАЬВ/С. В результате изучения острой токсичности установлено значение ЬГ)50 салифена (450 мг/кг), что позволяет отнести его к группе умеренно токсичных веществ по степени воздействия на организм человека. Таким образом, по этому показателю салифен занимает промежуточное положение между фенибутом (Ы)50750 мг/кг) [12] и кислотой салициловой (ЬО50 около 400 мг/кг) [120].
Изучение нейропротекторного действия салифена проводилось в условиях гравитационной ишемии, необратимой одномоментной окклюзии общих сонных артерий и окклюзии средней мозговой артерии подопытных животных.
Проведенное исследование состояло из нескольких этапов:
1. Оценка влияния соединений па выживаемость животных на модели гравитационной ишемии.
2. Исследование влияния курсового лечебного введения соединений на выживаемость животных и на модели двусторонней одномоментной необратимой окклюзии общих сонных артерий.
3. Оценка влияния однократного внутривенного введения соединений на параметры локального мозгового кровотока в период постишемической реперфузии, вызванной 2-сторонней обратимой одномоментной 10-минутной окклюзией общих сонных артерий в сочетании с управляемой гипотензией.
4. Опенка соединений в сравнительном аспекте с лекарственными препаратами позитивного контроля на морфофункциональное состояние структур головного мозга у животных, перенесших гравитационное ишемическое повреждение.
5. Изучение однократного профилактического и курсового лечебного введения соединений на неврологический статус и гистопатологические соединения структур головного мозга у крыс на модели интравазальной окклюзии средней мозговой артерии.
16
В результате было установлено, что как при разовом, так и при курсовом введении салифен оказывает достоверное влияние на степень неврологического дефицита, мнестическую и когнитивную функции животных [9-13].
В проведенных экспериментах салифен превосходил препараты сравнения фенибут и пирацетам по степени нейропротекторной, аитигипоксической и противоишемической активности. Это свидетельствует о высоком потенциале салифена как перспективного нсйропротскторного лекарственного средства [19, 33, 62].
1.3. Методы анализа фенибута и кислоты салициловой
1.3.1. Химические методы анализа фенибута, кислоты салициловой и их
некоторых производных
Идентификация фенибута и его производных. Фенибут по своей структуре представляет собой у-аминокислоту и химические методы его анализа основаны на наличии в молекуле карбоксильной группы, первичной алифатической аминогруппы, фенильного радикала и связанной хлороводородной кислоты.
По ФСП 42-03482164-01 подлинность фенибута устанавливают с помощью реакции со спиртовым раствором ииигидрина. В результате образуется синефиолетовое окрашивание [83].
В ФСП 42-00380051-00 для идентификации фенибута предлагается использовать реакцию, основанную на образовании И-гидроксиметильного производного с раствором формальдегида. Для этого к раствору лекарственного вещества прибавляют фенолфталеин и натрия гидроксид, при этом раствор окрашивается в розовый цвет. Далее к полученному раствору добавляют раствор формалина, что сопровождается обесцвечиванием раствора [82].
Фенибут также дает характерную реакцию на хлориды с серебра нитратом в азотнокислой среде. В результате образуется белый творожистый осадок, растворимый в аммиаке [82, 83].
В.А. Дубовик с соавт. предложено использовать для идентификации производных фенибута - гаммоксина, мефебута и пикамилона реакцию на
17
- Київ+380960830922