СОДЕРЖАНИЕ
Содержание...................................................... 2
Список сокращений............................................... 3
Введение........................................................ 5
1. Обзор литературы............................................ 13
2. Материалы и методы.......................................... 44
2.1. Материалы.................................................. 44
2.2. Приборное обеспечение и расходные материалы................ 46
2.3. Методы исследований........................................ 47
3. Результаты собственных исследований......................... 65
3.1. Анализ распространения вируса гриппа птиц типа А подтипа
Н5К1в мире и на территории Российской Федерации................. 65
3.2. Изучение клинических признаков и патологоанатомических изменений при гриппе у различных видов птиц.......................... 76
3.3. Сравнительное изучение вирусологических, молекулярнобиологических (ПЦР), иммунохроматографических методов при детек-
ции высокопатогенного гриппа птиц в патматериале.............
3.4. Изучение биологических и генетических свойств выделенных изолятов....................................................................
3.5. Сравнительное изучение серологических методов диагностики ^ гриппа птиц ИФА и
РТГА..............................................................
3.6. Изучение напряженности поствакцинального иммунитета к вирусу гриппа Н5М1 у различных видов птиц................................ 99
3.7. Влияние иммуностимулирующих препаратов на эффективность ^ ^
вакцинации против гриппа..........................................
109
Обсуждение результатов............................................
112
Выводы............................................................
Практические предложения.........................................
115
Список литературы................................................
!
)
Список сокращении.
впгп высокопатогенный грипп птиц
воз Всемирная организация здравоохранения
ИФА иммуноферментный анализ
МЭБ Международное эпизоотическое бюро
ПЦР полимеразная цепная реакция
РВ-ІТЦР полимеразная цепная реакция в реальном времени
РДП реакция диффузионной преципитации
РНК рибонуклеиновая кислота
РТГА реакция торможения гемагглютинации
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота
іРН реакция нейтрализации
РТНА реакция торможения нераминидазной активности
АР Крым автономная республика Крым
МДВК наименование культуры клеток
к ДНК копийная дезоксирибонуклеиновая кислота
ВГП-А вирус гриппа птиц типа А
ГГІ грипп птиц
РГЛ реакция гемагглютинации
ЭЭЖ экстраэмбриональная жидкость
МПА мясопептонный агар
МПБ мясопсптонный бульон
ч.д.а. чистый для анализа
х.ч. химически чистое
ГАЕ гемагглютинирующая единица
ВКО внутренний контрольный образец
пко положительный контрольный образец
СПЭВ культура клеток почки поросенка
оп оптическая плотность
чжо отрицательный контрольный образец
Таурус-1 наименование культуры клеток
КЭ куриные эмбрионы
цпд цитопатическое действие
ВПВГП высокопатогенный вирус гриппа птиц
СПФ-КЭ куриные эмбрионы свободные от специфических патогенов
СПФ свободный от специфических патогенов
З
Вспышки заболеваний, вызванные высоко патогенными штаммами вируса гриппа птиц (H7N1) и (H7N7), регистрировались достаточно часто в середине прошлого столетия в странах Северной и Южной Америки, на Ближнем и Дальнем Востоке, в Европе, Великобритании, на территории Советского Союза (1, 31,54).
Высоко патогенные штаммы, относящиеся к подтипам Н5, были обнаружены у цыплят в Шотландии (II5N1) и (H5N3). В этот период складывается мнение, что все высоко патогенные штаммы относятся только к подтипам Н5 или Н7. Однако, в это же время в различных частях мира исследователи выделяют от различных видов птиц, как домашних, так и диких, изоляты вирусов гриппа Н5 и Н7, которые не вызывают заболевание т.е. являются апатогенными, но все же исторически было показано, что наибольшее количество проблем, обусловленных вспышками высоко патогенного гриппа птиц, было связано именно с вирусами, имеющими гемагглютинин Н5 и Н7 (54).
С тех пор как классическая чума птиц была определена как заболевание, вызываемое высоко патогенным вирусом гриппа птиц, появилась возможность более точной его идентификации. Начиная с 1950 г. и в последующие годы, исследователями при вспышках заболеваний среди птиц, во многих странах мира регистрировался грипп птиц типа А: в Австралии, Англии, США, Ирландии, Мексике, Пакистане и т.д. К 2007 г. грипп птиц по данным международного эпизоотического бюро регистрировался более чем в 50 странах мира, в том числе и в России. В последнее десятилетие 20 века интересная ситуация по гриппу типа А была отмечена в США: при вспышке заболевания у индеек был выделен вирус (H1N1), встречавшийся ранее у свиней (1, 54). Заболевание носило характер респираторного и сопровождалось также снижением яичной продуктивности. Впервые при этом было отмечено, что вирусы гриппа типа А, выделяемые от млекопитающих, могут вызывать заболевание у птиц. При изучении было
15
также показано, что вирус H1N1 может передаваться от уток к свиньям и что это происходит, возможно, в природе. Исторически случаи заражения людей гриппом птиц были очень редкими. В большинстве случаев это были легкие заболевания, проявлявшиеся в форме вирусного конъюнктивита, с полным последующим выздоровлением. H5N1 в этом смысле является исключением. Развитие тяжелой вирусной пневмонии у зараженных людей явилось главной особенностью Гонконгской вспышки. В Нидерландах были зарегистрированы случаи заболевания людей гриппом H7N7 (89). До настоящего времени случаи заболевания гриппом птиц людей в России не зарегистрированы (29). В 1997 г. впервые гриппом птиц H5N1 заболевают 18 человек в Гонг-Конге (82, 91,95,103). К 2008 г. (официальный сайт ВОЗ - http://www.who.int/ru)ony4aH заболевания гриппом H5N1 регистрировались более чем в 50 странах, по данным ВОЗ заболело 359 человек, в 226 случаях отмечался летальный исход.
Грипп птиц в России. Вспышки гриппа птиц Н6 ( по новой классификации Н9) на территории Советского Союза отмечались в 70-е годы, в т.ч. на территории Российской Федерации регистрировался в 1970-1971г.г. штамм А/курица/СССР/315/70. При этом у больной птицы отмечались угнетение, отказ от корма, снижение яйценоскости, диарея. Гибель птицы не превышала 2-5 %, с вынужденным убоем потери составляли 30 %. После 2-3 недельного нереболе-вания птица выздоравливала, и продуктивность ее восстанавливалась. В 1978-1979 г.г. в птицеводческих хозяйствах наблюдалось заболевание цыплят 45-47 дневного возраста, затем начали болеть куры других возрастных групп: от 60-450 дней. Наблюдался воздушно-капельный путь передачи инфекции. Летальность достигала 10-12%, также наблюдалось снижение яйценоскости до 50%. Наблюдались следующие клинические признаки: диарея помет зеленого цвета с большим содержанием слизи и уратов, жажда, сонливость, цианоз, судороги, коматозное состояние. При патологоанатомическом вскрытии наблюдались
16
- Київ+380960830922