2
СОДЕРЖАНИЕ
стр.
ВВЕДЕНИЕ.............................................. 5
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ....................................... 12
1.1. Социально-экономическое значение туберкулеза........... 12
1.2. Культивирование микобактерий на питательных средах 27
1.3. Молекулярно-генетические методы диагностики туберкулеза . 39
1.4. Химиопрофилактика туберкулеза животных................. 46
1.5. Иммуномодуляторы в животноводстве и ветеринарии 57
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ............................... 62
Материал и методы исследований....................... 62
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ................................ 71
2.1. Эпизоотологическая характеристика туберкулеза крупного
рогатого скота......................................... 71
2.1.1. Эпизоотическая ситуация в РФ........................... 71
2.1.2. Влияние возрастной структуры стада коров на сроки
оздоровления хозяйств от туберкулеза................... 76
2.1.3. Роль ареактивных к туберкулину телят в эпизоотологии
туберкулеза............................................ 79
2.1.4. Снятие ограничений по туберкулезу на фоне неспецифической реактивности крупного рогатого скота
к туберкулину. ....................................... 84
2.1.5. Автоматизированная система эпизоотологического
мониторинга............................................ 88
2.2. Совершенствование методов и средств диагностики
туберкулеза крупного рогатого скота.................... 91
2.2.1. Разработка плотных экспериментальных питательных сред
для культивирования микобактерий....................... 91
2.2.2. Разработка жидкой питательной среды для культивирования
микобактерий............................................ 112
2.2.3. Метод седиментации при обработке биоматериала от животных для бактериологического исследования на туберкулез 116
3
2.2.4. Электронный журнал учета культур микроорганизмов........... 119
2.2.5. Усовершенствование молекулярно-генетического метода исследования (ПЦР) на туберкулез.................................... 120
2.2.5.1. Модификация методики постановки ПЦР для индикации возбудителя туберкулеза из биоматериала от животных 120
2.2.5.2. Генетические праймеры для предварительной дифференциации микобактерий туберкулеза от атипичных на основе геномного полиморфизма длин фрагментов рестрикции ампли-конов............................................................. 132
2.2.6. Электронный кутиметр для оценки аллергической реакции
при введение туберкулинов................................. 136
2.3. Совершенствование методов и средств профилактики туберкулеза крупного рогатого скота................................... 140
2.3.1. Туберкулостатический препарат «Ниазон» в системе оздоровительных мероприятий при туберкулезе крупного рогатого скота........................................................... 140
2.3.1.1. Состав и общая характеристика............................ 140
2.3.1.2. Токсикологическая характеристика......................... 146
2.3.1.3. Фармакокинетика в сыворотке крови ....................... 154
2.3.1.4. Бактериостатическая активность........................... 156
2.3.1.5. Аллергизирующие свойства, влияние на аллергическую реактивность, образование Ь-форм и ультраструктуру микобактерий туберкулеза.................................. 161
2.3.1.6. Средство снижения токсичности противотуберкулезных препаратов ГИНК........................................... 169
2.3.1.7. Производственное испытание ниазона в системе оздоровительных мероприятий при туберкулезе крупного рогатого
скота..................................................... 171
2.3.2. Повышение протективных свойств вакцины БЦЖ с помощью
иммуномодуляторов 177
2.3.2.1. Иммуномоделирующие препараты РНК........................ 177
2.3.2.2. Производственное испытание сочетанного применения вакцины БЦЖ и РНК-иммуномодуляторов при туберкулезе молодняка крупного рогатого скота................................. 189
2.4. Экономическая оценка системы противотуберкулезных мероприятий...................................................... 190
2.4.1. Экономический ущерб, причиняемый туберкулезом.............. 190
30
должен быть исключен из состава питательных сред, в связи с чем предложенные Е.Х. Калфиным (1962), И.Н. Безредко, Г.Г. Мордовским (1971) среды содержат только желток.
В НаСТОЯЩее ВреМЯ существует МНОЖеСТВО ПрОПИСеЙ СИНТеТИЧеСКИХ И 1IO-лусинтетических питательных сред для культивирования микобактерий, а также сред, полностью состоящих из продуктов органического происхождения. Синтетические среды более просты по составу и экономичны. В качестве источника питания в них используются неорганические соли: К2НРО4, КН2РО4, Na2HPO.t, MgSC>4, C11SO4 и другие. Источником углерода могут служить глицерин, глюкоза, лимонная кислота, азота - аспарагин, гликокол. Оптимальное pH среды должно составлять 6,8-7,2.
Для выращивания микобактерий в медицинской и ветеринарной бактериологической практике в различные периоды нашли широкое применение питательные среды Сотона (1912), Л.М. Моделя (1928), Вакенгут с соавт. (1944), А.И. Перцавского (1953, 1958), А.И. Тогуновой, М.И. Логиновой
(1951), Г.Г. Старковой (1953), Б.Ф. Стукаловой (1956, 1957), А.И. Каграмано-ва (1959), М.А. Линниковой с соавт. (1959), Л.И. Ивановой (1960), Л.И. Трофимовой (1967), Sula (1961) (цит. по Е.А. Финкель с соавт., 1977). Более широкое применение получили плотные питательные среды - Hohna, Stonebrink, Левснштейна-Йенсена, Гельберга, Петраньяни (Н.С. Боганец, 1988). На совершенствование этих и создание новых аналогичных сред в различные периоды были направлены усилия многих исследователей.
Для ускорения роста микобактерий используются разнообразные средства и приемы, в том числе различные добавки в питательные среды, изменение режимов стерилизации, физическое воздействие на возбудителя и др. В качестве факторов роста используют также добавки природного происхождения в виде экстрактов, вытяжек и настоев (Е.Л. Рубан, Г. Шлегель, 1972; С. Дж. Перт, 1978; A.C. Пригода, B.C. Муратов, 1989).
Благотворное влияние на рост и развитие микобактерий туберкулеза оказывает добавление в среды сыворотки крови крупного рогатого скота (НА.
31
Александров, 1967; И.Р. Дорожкова с соавт., 1982; Колычев, 1985; A.JI. Лазовская, 1985, 1987, 1989; Н.М. Макаревич с соавт., 1987), а также приготовление сред на талой воде, повышающей жизнеспособность микобактерий и стимулирующей их размножение (А.Д. Ляпунова с соавт., 1984).
Стимулирующее влияние на рост и развитие микобактерий разных видов достигается добавлением в питательные среды цинка и жженой магнезии (Т.Г. Старкова, В.М. Солдатова, 1958; V. Alienspach, 1960; Л.И. Медведь с соавт., 1968), перфодекалина (A.A. Ющенко с соавт., 1987), глицерина в различных концентрациях (Л.М. Модель, Е.Ф. Сидельникова, 1955; Е.А. Фин-кель 1981, 1985; H.H. Коваль, 1977), а также глюкозы (Л.М. Модель, 1957; М.А. Кравченко, М.А. Ударцева, 1979).
Э.Р.Финном (1973) при испытании 57 биологически активных веществ и водорастворимых витаминов, аминокислот, углеводов, нуклеиновых кислот, а также сывороточного альбумина, твин-80, активированного угля, туберкулина, убитой взвеси микобактерий установлено стимулирующее влияние на их рост биотина, рибофлавина, пиридоксина, глицина, триптофана, глутаминовой и фолиевой кислот.
На рост М. bovis при инкубации на среде Моделя положительно влияет добавление цистина, триптофана, лизина, лейцина и пролина (Д.В. Макаров,
1984). Добавка суспензии из убитых атипичных микобактерий к плотным яичным средам ускоряет рост и повышает высеваемость патогенных микобактерий. (Б.Е. Керимжанова с соавт., 1995).
J. Gallagher, D. Horwill (1974) для выделения микобактерий из патологического материала испытывали модифицированную среду Миддлбрук 7Н11, содержащую олеиновокислый альбуминовый amp (R. Dubo et G. Middlbrook, 1947). Среду модифицировали добавлением 10% бычьей сыворотки крови, 0,5% лизированных эритроцитов барана и 0,0035% малахитовой зелени. Глицерин, присутствующий в среде 71111, не включали, считая, что он сдерживает рост микобактерий бычьего вида. Результаты исследований показали, что модифицированная среда Миддлбру к 7Н11 превосходит по скорости
- Київ+380960830922