2
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.....................................................4
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .......................................9
1.1. Общие сведения о туберкулезе
крупного рогатого скота ...............................9
1.2. Виды микобактерий, их свойства и роль
в заражении крупного рогатого скота...................11
1.3. Методы диагностики туберкулеза
крупного рогатого скота...............................18
1.3.1. Прижизненные методы диагностики
туберкулеза...........................................18
1.3.2. Послеубойная диагностика с видовой
идентификацией микобактерий...........................23
1.4. Использование метода спектофотомстрии для исследования биообъектов и диагностики
болезней животных.....................................37
1.5. Заключение по обзору литературы.......................40
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ..............................42
2.1. Материалы и методы исследований.......................42
2.2. Разработка методологических подходов использования спектрофотометрии для диагностики
туберкулеза ..........................................45
2.2.1. Приборное, лабораторное и иро!раммное обеспечение
экспериментов.........................................45
2.2.2. Подбор оптимальных разведений гемолизата
для получения характерных УФ-спектров, пригодных для диагностических исследований на туберкулёз............48
з
2.2.3. Выбор диапазона волн для получения диагностически значимых спектров гемолизата морских свинок и
крупного рогатого скота.............................50
2.2.4. Получение спектров гемолизата лабораторных животных, зараженных патогенными и атипичными микобактериями............................................53
2.2.5. Сравнительная оценка эффективности традиционных и разработанного методов диагностики
туберкулёза животных................................66
2.3. Определение спектров гемолизата от больных туберкулезом и здоровых коров.............................73
2.4. Применение спектрофотометри и в эксперименте для дифференциальной диагностики лейкоза
и туберкулеза крупного рогатого скота ..............76
ОБСУЖДЕНИЕ...............................................80
ВЫВОДЫ...................................................91
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ..................................93
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.........................................94
ПРИЛОЖЕНИЕ..............................................123
13
Микобактерии являются аэробами, неподвижны, окрашиваются по Грамму положительно. Возбудитель туберкулеза и другие микобактерии отличаются плео- и полиморфизмом. Изменения морфологических, культуральных и биологических свойств могут носить как временный, так и постоянный характер. Полиморфизм проявляется в образовании различных форм: нитевидных, актиномикотических, зернистых, кокковидных и некислотоустойчивых вариантов.
По данным JI.H. Кац, A.B. Волк, Н.Д. Константиновой (1974, 1981), В.Д. Тимакова, Г.Я. Каган (1973), к измененным формам микобактерий, имеющих значение в патологии человека и животных, относятся различные варианты, дефектные по клеточной стенке. Повреждения, связанные с дефектом, частичной или полной утратой клеточной стенки, приводят к значительным морфологическим и функциональным изменениям микобактерий, проявляющимся в появлении протопластов, сферопластов, форм гетероморфного росга и L-форм бактерий стабильных или нестабильных.
В структурном отношении микобактерии состоят из клеточной стенки, цитоплазматической мембраны и внутриплазматических мембранных структур, цитоплазмы и нуклеоида. Ряд авторов: A.A. Поляков, A.B. Куликовский (1971), Л.М. Кац, С.А. Гулевская, Л.П. Зубок (1972), С.А. Гулевская, М.Н. Немсадзе (1974),
А.Г. Хоменко, В.В. Ерохин (1982), Ю.С. Ченцов (1984), Т. Imaeda, М. Oqura (1963), ILK. Kolbel (1978) - на поверхности микобактерий выявляют слой, определяемый как микрокапсула, причем интенсивность ее развития и строения находится в прямой зависимости от количества экстрагируемого корд-фактора. Клеточная стенка имеет трехслойное строение и выполняет структурную и защитную функции. Цитоплазматическая мембрана также имеет трехслойное строение, и, инвагинируясь в цитоплазму, формирует внутриплазматическую мембранную систему (мезосомы). Цитоплазма микобактерий представляет собой основную массу клеточного содержимого, представленную сложной коллоидной системой. Цитоплазма содержит гранулы, представленные, в
14
основном, рибосомами, вакуоли и другие включения. Нуклеоид микобактерий представлен ДНК-содержащим материалом в виде фибрилл, гранул и конгломератов, располагающимся в осмиофобной зоне в центральной части клетки.
По данным A.B. Куликовского (1979), ультраструктура атипичных микобактерий сходна с субмикроскопической организацией патогенных микобактерий, но имеет и определенные отличия.
Химический состав микобактерий туберкулеза изучали P.O. Драбкина (1963), Т.В. Коронелли (1984), В.П. Шишков (1986), C. Ratledge (1982) и др. Ими установлено, что в микобактериях находится вода (80,9%), зольные (2,6%) и органические вещества (11,6%), в том числе липиды, белки, полисахариды и др. Из зольных веществ в микобактериях обнаружены фосфор, кальций, магний, натрий, калий, железо, цинк и марганец. Все вышеназванные вещества находятся в сложных соединениях, поэтому проявление их биологических свойств не тождественно проявлению свойств отдельных компонентов.
По данным Н.К. Kolbel (1978), белки составляют 57-84% сухой массы микобактерий, они имеют ряд характерных свойств, каждому виду микобактерий присущ свой набор характерных белковых фракций, которые можно использовать для идентификации различных видов микобактерий. Кроме того, белки микобактерий содержат до 18-20 аминокислот. Из микобактерий туберкулеза выделены туберкулопротеиды, которые являются полными антигенами, вызывая в организме животных специфические антитела. Кроме них, выделен нуклеопротеид, родственный нуклеопротеиду клеток соединительной ткани животных и человека.
Зарубежными исследователями: S.E. Rinaum, L.F. Afronti (1969), A. Misaki, N. Seto, I. Azuma (1974), T.M. Daniel, P.A. Anderson (1978), C. Ratledge (1982), T.M. Daniel, S.M. Debanne (1987) - установлено, что полисахариды составляют до 15% сухой массы микобактерий туберкулеза, присутствуют как в свободном, так и в связанном с фосфатидами, воском, нуклеиновыми
- Київ+380960830922