1
СОДЕРЖАНИЕ
Стр.
ВВЕДЕНИЕ 5
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 11
1.1. Характеристика ящура и его возбудителя 11
1.2. История производства противоящурных вакцин 12
1.3. Технология приготовления противоящурной вакцины 14
1.3.1. Размножение и культивирование вируса ящура 15
1.3.2. Очистка и концентрирование вируса ящура 16
1.3.3. Инактивация инфекционности вируса ящура 17
1.4. Адъюванты в противоящурной вакцине 19
1.4.1. Адъюванты в сорбированных вакцинах 21
1.4.2. Масляные адъюванты 23
1.4.3. Синтетические адъюванты 24
1.5. Механизмы действия адъювантов 26
1.6. Иммунитет при ящуре 27
1.7. Заключение по обзору литературы 29
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 33
2.1. Материалы и методы 33
2.1.1. Вирусы 33
2.1.2. Животные 33
2.1.3. Культуры клеток 34
2.1.4. Аппаратура 34
2.1.5. Адъюванты 34
2.1.6. Растворы и реактивы 35
2
2.1.7. Определение токсичности препаратов 35
2.1.8. Очистка вирусной суспензии 35
2.1.9. Определение титра инфекционности вируса 35
2.1.10. Инактивация инфекционности вируса 35
2.1.11. Определение авирулентности препаратов 36
2.1.12. Концентрирование антигена 36
2.1.13. Количественное определение вирусного белка 37
2.1.14. Реакция нейтрализации 37
2.1.15. Изготовление сорбированных вакцин 37
2.1.16. Изготовление эмульсионных вакцин 38
2.1.17. Контроль иммуногенности вакцин 39
2.1.18. Определение стерильности антигена 39
2.1.19. Определение реактогенности препаратов 39
2.1.20. Статистическая обработка результатов исследования 39
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 40
2.2.1. Адъюванты в протнвоящурных вакцинах 40
2.2.2. Изучение токсических свойств полиакриловой кислоты и ее сополимеров 41
2.2.2.1. Изучение реактогенных свойств ПАК на лабораторных и сельскохозяйственных животных 43
2.2.3. Изучение адъювантной активности ПАК и сополимеров ПАК на лабораторных животных 44
2.2.4. Изучение иммуногенной активности вакцин с синтетическими адъювантами 47
2.2.4.1. Изучение иммуногенной активности вакцин с ПАК на КРС 48
2.2.4.2. Изучение иммуногенной активности вакцин с ПАК на свиньях 52
10
Апробация результатов работы. Результаты исследований по теме диссертации доложены и опубликованы в материалах Международной научной конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии животных» (г. Владимир, 2003) и на заседаниях ученого совета Федерального государственного учреждения «Всероссийского научно-исследовательского института защиты животных» (ФГУ «ВНИИЗЖ») в 2002-2005 годах.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, из них 3 - в журнале «Ветеринарная патология» по перечню ВАК РФ.
Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 127 страницах и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, содержит 29 таблиц и рисунок. Список использованной литературы включает 204 наименований, из них 101 отечественных и 103 зарубежных. В трех приложениях представлены документы, подтверждающие достоверность результатов работы, ее научную и практическую значимость.
Выражаю благодарность научному руководителю доктору ветеринарных наук, профессору Михалишину Валерию Васильевичу за помощь при выполнении работы и ее оформлении, а также сотрудникам лаборатории биотехнологии за помощь при выполнении отдельных этапов работы и оформлении диссертации.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Характеристика ящура и его возбудителя Ящур - остро протекающая высококонтагиозная болезнь парнокопытных животных, проявляющаяся лихорадкой, везикулярными поражениями слизистых оболочек ротовой полости, бесшёрстных участков кожи головы, венчика, вымени, межкопытцевой щели, а у молодых животных - поражением миокарда и скелетных мышц.
Для него характерна тенденция к широкому распространению и эпизоотическому течению. В редких случаях болеют животные, не относящиеся к копытным, и люди (11,15,101,141).
Вирус ящура (ВЯ) состоит из одноцепочной линейной молекулы РНК (+1
о
РНК), молекулярной массой 2,8x10, заключенную в белковый капсид, состоящий из четырёх белков VP1, VP2, VP3, VP4. В зрелом вирионе содержится около 60 молекул каждого пептида. Кроме 4-х главных полипептидов, обычно обнаруживают один минорный капсидный полипептид (одна или несколько молекул или вирион) и небольшой полипептид VPg. На поверхности ВЯ обнаружено 3 участка нейтрализации. Один выявлен только на интактных вирионах (140S), 2-й на инактивированных вирионах и субъединицах (12S) и 3-й - на 140S и 128-структурах и полипептиде VP1. Один из участков нейтрализации, по-видимому, отвечает за взаимодействие вируса с клеточными рецепторами (129). Главный антигенный сайт ВЯ это участок, соответствующий 141-160 аминокислотным остаткам белка VP1, образующий петлю G-H, выступающую на поверхности (147). Кроме 140S (полные вирионы), обнаружены 758-капсиды, по размеру и форме подобные вирионам, но не содержащие РНК; белковые субъединицы 12S -14S и Via-антиген (4S) (Virus infection associoted) - термолабильный комплементсвязывающий (КС) антиген, образующийся в тканях инфицированного организма или на культуре клеток, но не является составной частью вируса. Он представляет собой РНК -репликазу. Via-антиген пригоден для контроля сывороток крови крупного рогатого скота (КРС) и свиней, а в культуре ВНК-21 он появляется на 8-й день
- Київ+380960830922