Иммунобиологические свойства вакцинного штамма КС вируса классической чумы свиней

Оглавление
Стр.
1. Обзор литературы 4
1.1. Введение 4
1.2. Современные вакцины против КЧС 8
1.3. Генно-инженерные вакцины 19
1.4. Маркированные вакцины 20
1.5. Безопасность живых вакцин 23
1.6. Иммунный ответ на живую вакцину 25
1.7. Время наступления и продолжительность иммунитета 28
1.8. Иммунитет и трансплацентарное инфицирование 32
1.9. Материнский колостральный иммунитет 34
1.10. Вакцинация на фоне колострального иммунитета 36
1.11. Эффективность вакцинации в производственных условиях 42
1.12. Заключение по обзору литературы 48
1.13. Цель и задачи исследования 52
2. Собственные исследования 54
2.1 Материалы и методы исследования 54
2.2. Результаты исследований 65
2.2.1. Культивирование, титрование и хранение вакцинного штамма КС вируса КЧС 65
2.2.1.1. Чувствительность различных линий клеток к вакцинному штамму вируса КЧС 65
2.2.1.2. Спонтанная контаминация клеточных линий вирусом диареи (ВД) крупного рогатого скота 66
2.2.1.3. Приготовление первичной культуры и субкультивирование клеток ТЯ 67
2.2.1.4. Продолжительность субкультивирования клеток ТЯ и накопление вируса 71
2.2.1.5. Накопление вируса в роллерной и статической культуре клеток ТЯ 72
2.2.1.6. Накопление вируса в зависимости от продолжительности выращивания 72
2.2.1.7. Накопление вируса в клетках и среде в процессе культивирования 73
2.2.1.8. Влияние способа заражения культуры клеток ТЯ на накопление вируса 74
2.2.1.9. Влияние заражающей дозы на уровень репродукции вируса КЧС 76
2.2.1.10. Чувствительность различных клеточных культур при титровании вируса КЧС 77
2.2.1.11. Чувствительность различных вариантов титрования вируса в культуре клеток 78
2
2.2.1.12 Влияние замораживания клеток ТЯ на ростовую 81
способность и чувствительность к вирусу
2.2.1.13. Влияние антител к ВД в ростовой среде на 82
чувствительность культуры клеток ТЯ к вирусу КЧС
2.2.1.14. Устойчивость вируса в процессе хранения при различной 85
температуре
2.2.1.15 Лиофилизация и сохранность вируса в сухом препарате 86
2.2.2. Изготовление сухой вакцины КС 88
2.2.2.1. Наработка вируса при оптимальном режиме 89
культивирования
2.2.2.2. Изготовление и контроль сухой вакцины 91
2.2.3. Иммунобиологические свойства вакцины КС 94
2.2.3.1. Корреляция биологической активности сухой вакцины КС 94
при титровании в культуре клеток РК-15 и на свиньях
2.2.3.2. Персистенция вакцинного штамма КС у привитых свиней 96
по данным ПЦР
2.2.3.3. Реактогенность штамма КС для кроликов 97
2.2.3.4. Антигенность и иммуногенность трех коммерческих 98
вакцин против классической чумы свиней
2.2.3.5. Изучение иммунобиологических свойств химерного 103
вируса КЧС/ВД КРС
3. Обсуждение результатов исследования 109
4. Выводы и практические предложения 115
5. Список литературы 117
6. Приложение 131
4
3
получен безопасный, ареактогенный и высокоиммуногенный вакцинный штамм С (Van Oirschot, 1999).
По-видимому, существуют различные варианты китайского штамма, аттенуированные длительным серийным пассированием на кроликах, которые используют в производстве вакцины (Van Oirschot, 2003). Изучение генетической основы аттенуации показало, что в 3'-некодирующей области генома С-штамма имеется непрерывная вставка из 13 богатых урацилом нуклеотидов, чего нет в вирулентном (Moormann 1996, Wong et al, 2001) или родительском штаммах (Wu et al, 2001). Однако до конца не ясна ее роль в аттенуации штамма С (Van Oirschot, 2003).
Свойства штамма С впервые были описаны Богнаром и Месарошем (1963). По их данным вакцина из этого штамма вызывала иммунитет к экспериментальному заражению у 95-100% свиней через 4-5 дней после однократной вакцинации, который длился не менее 2-3 лет. Вакцинация не только защищала от болезни, но и подавляла репродукцию вирулентного штамма вируса КЧС после экспериментального заражения (Biron et al., 1987) и, кроме того, предотвращала передачу его от привитых свиней нсиммунным свиньям, находящимся в контакте (Terpstra, Wensvoort, 1987). Хотя отдельные случаи горизонтальной передачи штамма С от привитых к не привитым свиньям имели место (Bognar, Meszaros, 1963, Biron et al., 1987, Terpstra, Tielen, 1976), он сохранял свойства аттенуации даже после 20-30 экспериментальных серийных пассажей на восприимчивых свиньях (Van Oirschot, 1999). Более того, штамм оставался безопасным для иммуносупрессированных свиней (Florent, Thomas, Leunen, 1969, Kamijyo et al., 1976). Фенотипически аттетгуация С штамма вируса КЧС проявляется в ограничении его размножения в организме свиней, главным образом, в лимфоидных тканях и, в первую очередь, в клетках миндалин (Terpstra, 1978), которые являются основными входными воротами инфекции в естественных условиях. Следует отметить, что вирусный антиген у вакцинированных свиней изредка обнаруживали в других органах (Terpstra,
1978). Штамм С может преодолевать плацентарный барьер супоросных свиней, однако при этом не вызывает каких-либо нарушений развития инфицированных плодов (Tesmer et al., 1973) и не причиняет вреда свиноматкам и новорожденным поросятам (Dingeldein et al., 1976; Marks, 1977; Van Oirschot, 2003).
Безопасность и высокая эпизоотологическая эффективность вакцинного штамма С была подтверждена в результате широкого применения в ряде стран (Bekaert, Leunen, 1969, Terpstra, Robijns, 1977, Van Oirschot, 2003). Производство оригинальной живой вакцины из штамма С основывается обычно на использовании крови, селезенки, лимфоузлов зараженных кроликов. Сухая кроличья вакцина по содержанию вакцинного вируса в 10-100 и более раз уступает культуральным вакцинам.
Стремясь усовершенствовать технологию массового производства и стандартизацию вакцины, многие исследователи пошли по пути изыскания чувствительных культуральных клеточных систем для размножения штамма С. Таким образом, в разработке и производстве живых вакцин против КЧС наметилось 3 независимых пути: 1) оригинальная вакцина из штамма С, размноженного в организме кроликов; 2) модифицированные вакцины из штамма С, адаптированного и размноженного в различных культурах клеток; 3) оригинальные вакцины, полученные из других штаммов: Тиверваль (Aynaud et al., 1976) и GFE (Shimizu, 1980), с самого начала аттенуированных и размноженных в различных культурах клеток при пониженной температуре. Все указанные вакцинные штаммы соответствовали требованиям OIE (2000).
Первые практически наиболее значимые исследования по получению и размножению вакцинных штаммов вируса КЧС в клеточных культурах с целью изготовления вакцины проведены в СССР и были завершены в 1967 году. С тех пор было налажено серийное промышленное изготовление двух живых вакцин с использованием для массового размножения двух клеточных систем: 1) культуры клеток тестикулярной ткани ягнят - вакцина JIK-