2
Оглавление
1. Введение.............................................................. 4
2. Литературный обзор.................................................... 9
2.1. Эпизоотологическая справка по бешенству............................ 9
2.2. Характеристика вируса бешенства.................................... 14
2.3. История изготовления вакцин против бешенства....................... 16
2.4. Культивирование вируса бешенства................................... 19
2.5. Инактивированные вакцины против бешенства
и методы их контроля............................................... 29
3. Собственные исследования.............................................. 35
3.1. Материалы и методы................................................. 35
3.2. Результаты исследований............................................ 43
3.2.1. Выбор чувствительной клеточной модели и
системы культивирования.......................................... 43
3.2.2. Разработка технологии выращивания клеток в суспензии........... 46
3.2.2.1. Роллерное культивирование.................................. 47
3.2.2.2. Спиннерное культивирование................................. 49
3.2.2.3. Хранение клеток............................................ 50
3.2.3. Разработка технологии получения вирусного сырья
в суспензии...................................................... 53
3.2.3.1. Роллерная суспензия........................................ 54
3.2.3.2. Спиннерная суспензия....................................... 57
3.2.3.3. Хранение вирусного сырья................................... 61
3.2.4. Усовершенствование технологии изготовления инактивированных антирабических вакцин................................ 63
3.2.4.1. Выбор штамма вируса........................................ 63
3.2.4.2. Условия инактивации........................................ 64
3.2.4.3. Конструирование вакцинных препаратов....................... 66
3.2.4.4. Изготовление производственных серий
инактивированных вакцин...................................... 67
3.2.4.5. Условия хранения вакцин.................................... 68
3.2.5. Разработка схемы иммунобиологического контроля и
условий применения инактивированных вакцин....................... 70
3.2.5.1. Оценка безвредности и иммуногенности вакцин................ 70
3.2.5.2. Влияние кратности прививки на поствакцинальны иммунитет 72
3.2.5.3. Изучение длительности иммунитета........................... 74
3.2.6. Рекомендации по технологии
изготовления и контролю вакцины.................................. 75
4; Обсуждение............................................................ 77
5. Выводы................................................................ 86
6. Практические предложения.............................................. 88
7. Список литературы..................................................... 89
8. Приложения........................................................ 114
Список сокращений
АГ - антиген
В НК-21- перевиваемая линия клеток почки новорожденного сирийского хомячка БСА- бычий сывороточный альбумин ВН-антитела- вируснейтрализующие антитела в/м - внутримышечно в/б - внутрибрюшинно ЗФР - забуферный физиологический раствор
ИмДзо - 50%-ная иммунизирующая доза
ИРТ инфекционный ринотрахеит
КРС - крупный рогатый скот
ККИД50“ 50%-ная культурально - клеточная инфекционная доза
МН- микроносители
МЛД50 - 50%-ная мышиная летальная доза
МФА - метод флюоресцирующих антител МЕ - международные единицы
ПЭКр-85 - перевиваемая линия клеток почки эмбриона кролика
ПС - перевиваемая линия клеток почки сайги
ПТП - перевиваемая линия клеток тестикул поросенка
PH - реакция нейтрализации
CV -1 - перевиваемая линия клеток почки африканской зеленой мартышки
ТФ ИФА - твердофазный иммуноферментиый анализ ТЦД50- 50%-ная тканевая цитопатическая доза ФГМ - ферментативный гидролизат мышечный ЦПД - цитопатическое действие ЭД50 - 50%-ная эффективная доза NIH - тест Национального Института Здравоохранения
Vero - перевиваемая линия клеток почки африканской зеленой мартышки
HABEL- Модифицированный тест NIH, разработанный Karl Habel
и
МДВК- перевиваемая линия клеток почки теленка Wi-38 диплоидная культура клеток легкого человека NIL-2 перевиваемая линия клеток фибробласты хомяка
Мордовии и Свердловской области. Незначительное снижение общего числа эпизоотических очагов и случаев болезни в 1997 году никак нельзя рассматривать, как признак улучшения ситуации. Она остается очень опасной и чревата последствиями. Бешенство продолжает наступать (В.П. Быков, М.Г. Таршис, 1996; А.Е. Непоклонов, H.A. Яременко, 2003).
Случаи антропоургического бешенства относительно редки, несмотря на высокий риск их возникновения. Так, в 1998 году в Центральном регионе произошло резкое увеличение заболеваемости животных, которое можно квалифицировать как эмерджентную ситуацию, особенно в Московской области. Пиковые значения превышали среднегодовые уровни в 2 раза для РФ, в 4 раза для регионов и более чем в 10 раз для области (В.В. Макаров и др., 2002; В.В. Макаров, С.И. Джупина и др., 2002).
Меняются некоторые особенности эпизоотии, важные как в практическом, так и в научном отношении. Резервуаром вируса бешенства и основными распространителями болезни остаются дикие животные из семейства псовых - лисица, волк, енотовидная собака, корсак, а в тундровой зоне песец (А.М. Шесто-палов и др., 2001; A.A. Мовсесянц, 2003).
Судя по эпизоотической • статистике, территориальное распространение бешенства имеет энзоотичный и стационарный характер. Во многих регионах Восточной Европы, а также в регионах РФ, оно (заболевание) прочно укоренилось. Ежегодно регистрируют в РФ от 1000 до 5000 и более случаев бешенства домашних животных и около 10 случаев бешенства людей (Bourhy et al., 1999; С.А. Дудников, 2003).
Регион Нижней Волги и дельты известен как один из старейших, относительно крупных и устойчивых территориальных очагов бешенства. Ю.А. Исаков в 1949 году описал ситуацию болезни в Астраханской области, связанную с носитсльством возбудителя этой инфекции у енотовидных собак и рыжих лисиц. С 1990-1995 г. видовой состав пораженных бешенством животных несколько изменился: увеличилась доля заболеваемости КРС до 52% и овец -16%,
снизилась у собак 10%, диких и промысловых животных до 8,3%, кошек 6,6% (В.П. Быков, М.Г. Таршис, 1996).
В Кабардино-Балкарии и Северной Осетии эпизоотия бешенства с самого начала имела смешанный характер, который сохранился до настоящего времени. Источниками болезни являются не только дикие хищники, но и популяции бродячих и безнадзорных собак (М.И. Калабеков, 1999).
В зонах стационарного неблагополучия по бешенству постоянно сохраняется риск заражения сельскохозяйственных животных и в первую очередь крупного и мелкого рогатого скота, особенно молодняка. Соответственно остается необходимой специфическая профилактика животных (диких, бездомных, домашних и сельскохозяйственных) эффективность, которой не требует новых доказательств (В.М. Авилов и др., 1998; С.К. Дымов, Ю.Г. Юшков, A.C. Дон-ченко и др., 2003). Для этих целей используют как живые, так и инактивированные вакцины, но и наряду с вакцинацией применяется не менее действенный метод регулирования численности популяций диких плотоядных (Krocza, Schaden, 1983).
- Київ+380960830922