Содержание
Список сокращений.........................................4
Введение..................................................5
1. Обзор литературы.......................................9
1.1 Роль Огп1!коЬас1ег1ит rhinotracheale (ОЯТ) в инфекционной
патологии птиц.......................................9
1.2 Распространенность возбудителя орнитобактериоза 11
1.3 Орнитобактериоз......................................13
1.3.1. Способы распространения. Клинические признаки и патологоанатомические изменения..........................13
1.3.2. Краткая характеристика биологических свойств ОИТ..15
1.4 Экспериментальное воспроизведение инфекции...........22
1.5 Диагностика орнитобактериоза птиц....................25
1.5.1 Бактериологическая диагностика орнитобактериоза....25
1.5.2 Серологическая диагностика орнитобактериоза........27
1.5.3 Диагностика орнитобактериоза с использованием иммуноферментного анализа................................31
1.5.4 Молекулярно-генетические методы в диагностике орнитобактериоза.........................................33
Заключение...............................................49
2. Собственные исследования..............................51
2.1 Материалы и методы...................................51
2.1.1 Референтные культуры ОЯТ...........................51
2.1.2 Изучение популяции О. г/г1по1гасИеа1е с применением методов сканирующей электронной микроскопии.............51
2.1.3 Пробы патологического материала....................52
2.1.4 Пробы сыворотки крови..............................53
2.1.5 Объект биологическихисследований...................53
2.1.6 Питательные среды..................................53
2.1.7 Биохимические тесты ...............................55
2.1.8 Гест на образование каталазы.......................55
2.1.9 Тест на образование оксидазы.......................56
2.1.10 Создание видоспецифичных праймеров................56
2.1.11 Выделение ДНК.....................................56
2.1.12 Постановка ПЦР-амплификации.......................60
2.1.13 Электрофоретический анализ продуктов ПЦР..........63
2.1.14 Постановка ИФА....................................63
2.2 Результаты собственных исследований..................65
2.2.1 Оценка морфологических, культуральных и биохимических свойств ОЛТ..............................................65
2.2.2 Изучение популяции ОЯТ при сканирующей электронной микроскопии..............................................70
2.2.3 Результаты бактериологических исследований.........74
2.2.4 Экспериментальное воспроизведение инфекции.........76
2.2.5 Изучение распространенности орнитобактерий.........78
2.2.6 Разработка метода обнаружения возбудителя орнитобактериоза на основе ПЦР...........................81
2.2.7 Сравнительный анализ методов выделения ДНК из патологического материала от птиц........................82
2.2.8 Оптимизация процесса амплификации..................83
2.2.9 Апробация чувствительности и специфичности сконструированной ПЦР тест - системы.....................85
2.2.10 Определение возможности использования метода ПЦР для обнаружения О. г1ипоггас1геа1е в патологическом материале от
птиц.....................................................87
3. Обсуждение результатов исследовании...................89
Выводы...................................................97
Практические предложения.................................99
Список литературы........................................99
Приложение ........................................... 114
11
осведомлен о возможности Ornithobacterium rhinotrcichecile вызывать инфекцию [120].
1.2 Распространенность возбудителя орнитобактериоза
Первое сообщение о выделении Ornithobacterium rhinotracheale было опубликовано Hinz К.-Н. et. al.(1994) в Германии. Упоминалось, что в 1981 году была обнаружена пастерелла - подобная бактерия у индеек 5-неделыюго возраста с симптомами респираторного заболевания, в настоящее время называемая Ornithobacterium rhinotracheale.
Пастерелла-подобная бактерия в 1987 году в Венгрии была выделена от уток, страдающих респираторным заболеванием [80].
В 1991 году Jan de Preez исследовал новое респираторное заболевание у бройлерных кур из Южной Африки. Он выделил грамотрицательную, полиморфную, палочковидную, медленно растущую бактерию, не относящуюся ни к одному из ранее описанных видов.
Предварительно новая бактерия была обозначена как полиморфная грамнегативная палочка (PGNR), пастерелла -подобная или кингелла-подобная [71,82, 120].
В 1993 году в Нидерландах и Германии в нескольких стадах индеек наблюдались респираторные заболевания,
сопровождающиеся экссудацией носовых пазух, чиханием, слезотечением, опуханием подглазничных синусов, некоторым замедлением роста.
В Германии инфекцию у индюшек наблюдали большей частью в возрасте от 14 недель и старше [84,92,87].
В Нидерландах инфекции, сходные с инфекцией Pasteurelia multocida, наблюдались у птиц в очень раннем возрасте. Грам-
12
негативные палочки, сходные с теми, что были выделены в Южной Африке, Германии, Венгрии, изолировали из тканей пораженных птиц [120,59].
Позднее также установили, что сходные полиморфные грам-негативные палочки были выделены от птиц с респираторным симптомокомплексом в Израиле, Бельгии, Франции, Англии и в США [63, 101, 72].
Вполне возможно, что инфекции, вызванные Ornithobacterium rhinotracheale, в птицеводстве до 1993 могли быть ошибочно отнесены к вирусным заболеваниям или инфекциям, вызванными другими видами бактерий, такими как Pasteurella, Flavobacterium, Cytophaga, Haemophilus, Riemerella [85,64,32,30].
После некоторых изменений в схеме бактериологического исследования материала от птиц с респираторными заболеваниями (длительное инкубирование при 5 - 10% атмосферного С02) О. rhinotracheale неоднократно выделялась в случаях аэросаккулитов и пневмоний от индюшек и бройлерных кур во всем мире [70,109,117,93,60].
Были сообщения, что в 1995-1996 годах в различных областях США инфекции, вызванные О. rhinotracheale, сопровождались сильными пневмониями с коэффициентом летальности у взрослых индюшек - 1-15%, а иногда до 50% [62,74].
Присутствие возбудителя орнитобактериоза у водоплавающих птиц в Южной Америке и Азии было установлено серологическими методами [77,65].
Vandamme P. et al. (1994) дали описание основных фенотипических признаков и биохимических особенностей микроорганизма и предложили название О. rhinotracheale.
Эти же авторы предложили название нового рода Ornithobacterium (состоящее из ornito - относящаяся к птицам,
- Київ+380960830922