СОДЕРЖАНИЕ
стр.
ВВЕДЕНИЕ........................................................ 5
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ................................................ 8
2.1. Распространение возбудителя ботулизма и его характеристика 8
2.2. Современные представления о возбудителе ботулизма......... ю
2.3. Химический состав и антигенная структура возбудителя ботулизма и его токсина.............................................. 13
2.4. Лабораторная диагностика и идентификация возбудителя ботулизма и его токсина........................................... 17
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ....................................... 26
3.1. Материалы и методы....................................... 26
3.2. Результаты собственных исследований...................... 30
3.2.1. Ветеринарно - санитарная экспертиза продуктов животноводства для выявления ботулинического токсина................. 30
3.2.2. Изучение фенотипических свойств штаммов возбудителя ботулизма..........................................................33
3.2.2.1. Изучение антигенных свойств возбудителя ботулизма и его токсина................................................... 36
3.23. Разработка способа получения ботулинической сыворотки.... 40
3.2.3.1. Выделение и очистка противоботулинических иммуноглобулинов сыворотки крови кроликов.............................. 43
3.2.4. Изготовление иммунопероксидазных коныогатов к ботулини-ческому токсину............................................... 46
3.2.5. Изготовление флюоресцирующих иммуноглобулинов к белковому антигену возбудителя ботулизма......................... 48
3.2.6. Ветеринарно - санитарная экспертиза продуктов животноводства и рыбоводства............................................ 51
3.2.6.1. Отбор и подготовка проб к исследованию........... 51
3.2.6.2. Индикация ботулинического токсина в мясных и рыбных
3
консервах методом ИФА................................ 54
3.2.63. Индикация возбудителя ботулизма в мясных и рыбных
консервах методом МФА................................ 56
З.2.6.4. Индикация возбудителя ботулизма и его токсина в вяленой рыбе 59
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.................. 61
5. ВЫВОДЫ............................................... 70
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ............................. 71
7. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ..................... 72
8. ПРИЛОЖЕНИЯ........................................... 87
8
- ветеринарно - санитарная экспертиза продуктов животноводства и рыбоводства при ботулизме методами экспресс - анализа (ИФА и МФА).
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 87 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 6 рисунками. Список используемой литературы включает 163 наименования, из них 114 источников отечественных авторов, 49 зарубежных.
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. РАСПРОСТРАНЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЯ БОТУЛИЗМА В ПРИРОДЕ И ЕГО ХАРАКТЕРИСТИКА
Ботулизм - тяжелая интоксикация, возникающая в результате употребления в пищу продуктов, содержащих токсин Clostridium botulinum, и характеризующаяся преимущественным поражением центральной и вегетативной нервной системы.
Существующая статистика не отражает истинных размеров заболеваемости людей и животных ботулизмом. Она более достоверна и полна там, где осуществляется детальное лабораторное обследование всех острых и смертельных случаев заболеваний, и практически отсутствует во многих странах, где случаи смерти не подвергаются экспертизе и не имеется условий для госпитализации больных. Даже в развитых странах только за последние десятилетия эту группу тяжелых интоксикаций стали дифференцировать по типам токсинов, обусловивших их развитие, что является непременным условием для своевременного и правильного лечения больного [109].
Возбудитель ботулизма Clostridium botulinum (синоним Bacillus botulinus) был описан в 1896 г. Ван — Эрменгемом (Е. Van Ermengem) во время расследования вспышки ботулизма в Германии. Изучение этиологии бо-
9
тулизма в последующие годы показало, что заболевание вызывается несколькими возбудителями, относящимися к одному виду. Известно 7 типов возбудителей ботулизма: А, В, С, D, Е, F, G. Деление на типы связано с оригинальной антигенной структурой экзотоксина, продуцируемого клеткой. Токсин каждого типа может быть полностью нейтрализован только сывороткой гомологичного тина.
Возбудитель ботулизма широко распространены в природе. Местом постоянного обитания спор этих бактерий является почва, откуда они попадают в воду, на фрукты и овощи, в пищевые продукты, фураж, а затем в кишечник человека и животных - млекопитающих, птиц, рыб, беспозвоночных. [125]
К. Meyer [147], анализируя заболеваемость ботулизмом в мире за 50 лет, полагает, что за этот период заболело 5635 человек, из которых 1714 умерли. Эта статистика основана на отдельных публикациях. В США за 65 лет (1899 - 1964) зарегистрировано 1574 заболевших, из которых 955 (60,6%) умерли. В России с 1818 по 1913 г.г. сообщено о 609 больных ботулизмом, около половины которых умерли. В Японии с 1951 по 1964 г.г. зарегистрировано 297 больных ботулизмом, из которых 78 умерли. Во Франции до оккупации фашистскими войсками зарегистрировано 24 человека заболевших ботулизмом; за время оккупации количество заболевших превысило 1 тысячу человек, что, как оказалось, было связано с употреблением в пищу мяса свиней, убитых в антисанитарных условиях.
По данным В.В. Пилата, О.М. Разживиной и др.[88] частота распространения ботулизма в Ульяновской области РФ в структуре пищевых отравлений составляет в разные годы (1996 - 2000 г.г.) от 32% (1998 г.) до 100% (2000 г.). В 2000 году причиной ботулизма послужили в 5 случаях вяленая рыба домашнего приготовления (55,5%), в остальных случаях - маринованные грибы домашнего приготовления (45,5%). Из 10 заболевших 1 (11,1%) человек умер. Среди пострадавших преобладает (88,9%) взрослое население в возрасте от 20 до 58 лет. Обращает внимание выраженная сезонность: наибольшее число случаев регистрировалось в феврале - 5 случаев, во 2 кварта-
- Київ+380960830922