СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.........................................................4
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Объективные предпосылки возникновения метода тканевой
инженерии.......................................................10
1.2. Особенности морфологии суставного хряща....................11
1.3. Методы восстановления повреждений суставного хряща.........20
1.3.1. Радикальные хирургические методы.........................20
1.3.2. Методы тканевой инженерии................................23
1.3.2.1. Клеточная терапия......................................23
1.3.2.2. Трёхмерные системы поддержки хоидрогенпого фенотипа....25
1.4. Альтернативные методы создания трёхмерных хондротрансплангатов..29
1.5. Механическая стимуляция при создании тканеинженерных хондротрансплантатов............................................31
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ...............................36
2.1. Изолирование и культивирование лошадиных
хондроцптов в монослое..........................................37
2.2. Культивирование хондроцитов в условиях
трёхмерного состояния...........................................39
2.3. Морфологические, биохимические, гистологические
и иммуно-гистохимические исследования...........................42
2.3.1. Биохимические исследования...............................42
2.3.2. Гистологические и иммуногистохимические исследования...44
2.4. Статистические методы исследований.........................45
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ......................................46
3.1. Анализ морфологических изменений тканеииженерных хрящевых конструктов............................................46
3.1.1. Морфологические изменения мембраны Chondro-Gide00........46
ъ
3.1.2. Морфологические изменения на матрице Ethisorb*..........47
3.1.3. Морфологические изменения трёхмерных хрящевых конструктов изготовленных без использования
матриц-носителей...............................................48
3.1.3.1. Субклеточные изменения трёхмерных конструкции.........48
3.1.3.2. Макроскопическая оценка хондротрансплантатов..........49
3.2. Биохимический анализ тканеинженерпых
хрящевых конструктов...........................................51
3.2.1. Количественное определение кислых гликозаминогликаиов.5 1
3.2.2. Количественное определение гидроксипролина..............52
3.2.3. Количественное определение гидроксилизина...............53
3.3. Гистологический анализ тканеинженерных
хрящевых конструктов...........................................55
3.3.1. Гистоморфологическая оценка хондротрансплантатов
на матрице Chondro-Gide*.......................................55
3.3.2. Гистоморфологическая оценка хондротрансплантатов
на матрице Ethisorb*...........................................57
3.3.3.Г истоморфологическая оценка хондротрансплантатов
изготовленных без применения матрицы-носителя..................60
3.4. Иммуногистохимические исследования тканеииженерных хрящевых конструктов...........................................64
3.4.1. Иммуногистохимический анализ коллагена II типа в хондротрансплантатах изготовленных без применения искусственных матриц - носителей...............................64
3.4.2.Иммуногистохимический анализ сульфатировапных
гликозаминогликанов в ТХКбМН...................................66
4. ОБСУЖДЕНИЕ..................................................70
ВЫВОДЫ.........................................................85
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК.......................................88
8
искусственных матрицах-носителях хрящевые конструкты, изготовленные по оригинальной методике, проявляют значительное морфологическое и биохимическое сходство с нативным гиалиновым хрящом.
Практическое значение исследований. Оценена практическая значимость коммерческих матриц-носителей для использования в ветеринарной практике крупных животных на примере лошадей.
Предложенный способ ми кро капельного нанесения суспензии хондроцитов на матрицы-носители и последующего предкультивирования представляет интерес для специалистов медико-биологического профиля, занимающихся проблемами тканевой инженерии гиалинового хряща.
Изменение биохимических и гистологических параметров внеклеточного хрящевого матрикса под влиянием механического воздействия свидетельствует о целесообразности использования данного вида стимуляции трёхмерных клеточных культур в условиях in vino как подготовительного этапа при оперативном способе репарации суставных повреждений.
Использование лошади в качестве модельного животного и полученные результаты позволяют не только расширить спектр лечебных мероприятий в случаях травматических артрозов, например, спортивных лошадей, но и дают возможность применения полученных данных в клинических исследованиях, поскольку коленный сустав лошади наиболее схож по таким параметрам, как толщина, площадь и степень нагрузки, с аналогичным суставом человека.
Апробация. Основные положения и результаты диссертационной работы докладывались на международной научно-практической конференции "Проблемы развития коневодства и конного сорта в России", Новосибирск, 2003; 11. Heiligenstädter Kolloquium - Technische Systeme für Biotechnologie und Umwelt, Heiligenstadt, Germany, 2003; Conference "Strategies in Tissue Engineering", Würzburg, Germany, June, 2004; 2nd World Congress on Regeneralive Medicine, Leipzig, Germany, May, 2005; 4th Annual Meeting of the European Tissue Engineering Society, Munich, Germany, August, 2005; региональной научно-практической конференции "Болезни лошадей",
- Київ+380960830922