ОГЛАВЛЕНИЕ
|*х
с
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 7
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 11
2.1. Перевиваемые линии клеток в биотехнологии 11
2.2 Проблемы стабильности биологических свойств 19
перевиваемых линий клеток
2.2.1. Роль отдельных факторов систем культивирования в 19
дестабилизации кариологических и биотехнологических показателей клеточных культур
2.2.2. Стандартизация систем культивирования клеток и методы 29
контроля стабильности перевиваемых линий клеток
2.3. Цереброспинальная жидкость крупного рогатого скота как 36
биологически активное средство
2.3.1 Краткие сведения о цереброспинальной жидкости 36
2.3.2 Цереброспинальная жидкость как биологически активное 43
средство
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 54
3.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 5 5
3.1.1. Культуры клеток 5 5
3.1.2. Питательные среды, сыворотка крови, ликвор, растворы 56
3.1.3. Реактивы и оборудование 59
3.1.4. Животные 60
3.1.5. Вирусы 60
3.1.6. Методы культивирования клеток 60
3.1.7. Методы цитоморфологичсского и кариологического 62
исследования клеточных культур
3.1.8. Бактериологические методы 63
3.1.9. Вирусологические методы 63
3.1.10. Статистические методы 63
3.2.
3.2.1.
3.2.1.1.
3.2.1.2.
3.2.1.2.1.
3.2.1.2.2. 3.2.1.3.
3.2.1.3.1.
3.2.1.3.2.
3.2.1.3.3.
3.2.2. 3.2.2.1.
3.2.2. 2.
3.2.2.3.
3.2.2.4.
3.2.3.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 65
Исследование вирусологических, токсических и 65 ростостимулиругощих свойств цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота
Оптимизация стерилизующей фильтрации и хранение 65 ликвора
Вирусологическое исследование ликвора 68
Контроль ликвора на контаминацию вирусом диареи 68 крупного рогатого скота
Исследование цереброспинальной жидкости на наличие 71 антител к вирусу ВУО
Изучение токсичности и ростостимулирующих свойств 71 ликвора в культуре клеток
Определение индекса цитотоксичности цереброспинальной 73 жидкости для клеток перевиваемых линий ПО и Г1С Изучение влияния цереброспинальной жидкости КРС на 76 адгезивные свойства ПЛК
Определение эффективности клонообразования клетками 77 линий ПО, ПС, МОВК и УЕ1Ю в питательной среде с ликвором
Оценка биологических характеристик перевиваемых линий 81 клеток
Оценка сублинии перевиваемых клеток почки овцы 81 ПО(ВНИИВВиМ)
Оценка сублинии перевиваемых клеток почки сайги ПС(ВНИИВВиМ) 82
Оценка перевиваемой линии клеток почки теленка МОВК 84
Оценка перевиваемой линии клеток почки африканской 85 зеленой мартышки УЕЯО
Изучение цитоморфологических, кариологических и 87
скота, причем клетки линий CV-1 и VERO были более пригодны для титрования вируса и постановки реакции нейтрализации, а культура клеток ВНК-21/13 - для накопления вирусного сырья (Куляшбекова, Гусев, Герасимов, Ковалева, Худяков, 1999).
Перевиваемые линии клеток почки теленка MDBK и почки эмбриона африканской козы ПЭАК были пермиссивны к вирусу болезни Акабанс (Балашова, Вишняков, Чурбанова, Витина, 1992; Балашова, 1993) и вирусу эпизоотической геморрагической болезни оленей (Лурия, 1972).
Рядом авторов продемонстрирована способность перевиваемой линии клеток почки теленка MDBK репродуцировать вирус чумы крупного рогатого скота в титрах на уровне 6,5-7,5 IgTIXRsa'Mi (Стрижаков, 1994; Старой, Дрягалин, Лядская, Бурмакина, 1995).
Сообщается, что эта культура клеток обеспечивала также более высокое накопление вируса ИРТ КРС (7,0-7,5 ^ТЦД5о,\1Л), чем клетки линии почки сайга (ПС) и ВНК-21/13 (6,0-6,7 ^ТЦД5о/Ч|Л) (Закутский, Жестерев, Козлова, Аверина, 1992; Закутский, Жестерев, Конакова, 1995). Они также были чувствительны к короновирусу телят (Yasumura, Kawakita, 1963; Dewelle, Pirot-ton, Raes, 1999).
В культурах MDBK, ПС, ПСГК, ПЭКр-85 вирус ринопневмонии лошадей индуцировал ЦПД, и не размножался в клетках РК-15 и CV-1 (Чевелева, Цыбанова, Вишняков, Семснихин, 1998).
Получены новые линии клеток из тканей и органов крупного рогатого скота. Л.Л. Мироновой в институте полиомиелита и вирусных энцефалитов установлена новая перевиваемая линия клеток из почечной тканей Bus. taurus L. Таурус-1 (1968).
Полученная оригинальная линия клеток почки теленка предложена в качестве тест-системы в экспериментах с вирусами гриппа, парагриппа и аденовирусами и на ее основе приготовлены два вида антигенных диагности-кумов (Миронова, Преображенская, Шитикова, Белоусова и др., 1998; Миронова, Хапчаев, 1995).
Этим же автором (Хапчаев, 1995) получена гетероплоидная линия клеток из почечной ткани зеленой африканской мартышки 4647, а также из сердца и языка (Миронова, Преображенская, Козлов, 1994), кожи и мышц эмбриона африканской зеленой мартышки 4921 (Миронова, Кудинова, Хороших, Попова и др., 1994), которые аттестованы в соответствии с требованиями ВОЗ.
Перевиваемая линия клеток ВВ82 установлена из клеток селезенки теленка. Данная ПЛК, имеющая 38 хромосом, чувствительна к вирусам лейкоза и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, западного и восточного энцефаломиелита лошадей и вирусу Синдбис (Vogel, Ross, Raines, 1980).
В лаборатории ВИЭВ Л.П. Дьяконовым и другими сотрудниками из первичной культуры клеток легкого эмбриона коровы методом спонтанной трансформации выделена перевиваемая линия клеток ЛЭК и из клеток коронарных сосудов теленка - ПЛК КСТ (Куликова, Хаертынов, 1965; Куликова, Дьяконов, Жидков, Гоголев, 1992; Куликова, Жидков, 1993).
Клетки линии ЛЭК были также пермиссивными для вируса чумы крупного рогатого скота (Глинских, Зусман, Устьянцев, Закирова и др., 1985), а ПЛК КСТ - к вирусу диареи крупного рогатого скота (Куликова, Дьяконов, Жидков, Гоголев, 1992).
Австралийскими исследователями перевиваемая линия клеток почки кошки CRJFK была использована для культивирования вируса панлейкопении кошек (Eagle, 1977).
Путем спонтанной трансформации получена новая перевиваемая линия клеток К из почечной ткани кошки (ПК-91) и показана перспективность ее использования для репродукции парвовирусов плотоядных (Дурыманов, Шестопалов, 1999).
Перевиваемая линия клеток эмбриона норки (ЭН) была наиболее пер-миссивной клеточной системой для вируса энтерита норок штамма “Родники” (Борисов, Старов, Хлыбова, Куляшбекова, 1995).
- Київ+380960830922