РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ
2.1. Використані в роботі мікроорганізми
Частину культур (E. carotovora subsp. atroseptica ЕАІ, ЕА2, ЕА3, ЕА4, ЕА5, E. carotovora subsp. сarotovora ЕС 55, ЕС 56, ЕС 57 і т. д. до ЕС 105 B. subtilis 101, 68, 105, BS 1, BS 2, BS 3 і т. д. до BS 86, BS 107, BS 934, BS 2924, BS 2931, B. brevis 15, 104, B. cereus 49, 88, 138, ТН 1, 3, 54, 51, 55, 72, 108, 109, 116, 136, 150, 168, 166, 159, 791, B. macerans BS 1, BS 2, і т. д. до BS 43, BS 153, B. megaterium BS1, BS2 і т. д. до BS 53, B. mycoides BS 1, BS 2 і т. д. до BS37, 107, 45, 65, 90, 103, 110, 114, 117, B. licheniformis BS1, BS 2 і т. д. до BS 69, BS 71, 79, 97, 133, В. роlуmуха BS 1, BS 2 і т. д. до BS 63, BS 65, BS 159, 74, 119, 159, 168, B. pumilus BS1, BS2 і т. д. до BS 61, BS 1071, 78, 103, 130, 164, B. sphaericus 4, BS1, BS2 і т. д. до BS 23, B. thuringiensis BS 1, BS 2 і т. д. до BS 8, Fusarium sp. BS1, Fusicladium dentriticum BS1, Lentinula edodes BS1, Pleurotus ostreatus BS1, Verticillium sp. BS1) виділено в Закарпатті. З колекцій одержано штами: B. alvei ATCC 6344, B. circulans ATCC 9966, B. globi-sporus АТСС 23301, B. pumilus ATCC 6632, ATCC 6051, B. thuringiensis subsp. sotto ATCC 19270; B. alvei NCIB 8199, B. alvei NCIB 8212, B. thiaminolyticus NCIB 8698, B. amilovorans NCIB 8292 , B. licheniformis NCIB 9375; B. alvei CCM 203, B. badius CCM 2113, B. brevis CCM 2050, B. coagulans CCM 2013, B. pulvifaciens CCM 38, B. sphaericus CCM 2120; B. entoniocidus subsp. subtoxicus CCEB 458; B. longissimus B-881 (з Iнституту мікробіології АН Росії, Москва), B. laterosporus NCTC 4824, B. macerans NCTC 6355, B. megaterium NCTC 10342, B. рantothenticus NCTC 8162, В. pasteurii NCTC 4822, B. polymyxa NCTC 10343; B. firmus ВКМ В-498, B. mucilaginosus ВКМ В-1574, B. pasteurii ВКМ В-1063, B. subtilis ВКМ В-61 (з Інституту біохімії та фізіології мікроорганізмів АН Росії, м. Пущіно), B. cereus DB 63/1, B. pumilus ДК 3712, ДВ25/І, ДВ 37/4, B. pumilus 8241 B. subtilis G2, 924, 931, 934, 940, 945, 953, 961,1106-1110, 1119, 133, 710, 27/4DB, 40/9DB, l34ПK, 15ПК, 18ПК, 77ПК, 94ПК2, 97ПК2, 97ПКІ, 97ПКЗ, 110ПК1, 110ПК2, 134ПК, 36/6ДВ, 40/8ДВ, 82с, 76с, 111с, 113с, 128c,132c, B. subtilis var. niger 12/С, B. subtilis 9035, E. carotovora subsp. atroseptica 5A, 8A, 4A, 16A, 18A, 33A, 37A, 38A, 40A, 45A, 47A, 49A, 50A, 53A, 54A, 60A, 67A, 74A, E. carotovora subsp. сarotovora 4А, 13А, 25А, 5, 27, 46, 48, 50, 53, 60, 80, 91,111, 80, ЕА144, ЕС159, 75, 144, 216, 258, 312, 482, 921, 8351, 8352, 8354, 1092, 8241, 8477, 8478, 8695, 8719, 8873, 8883, 8887, 8895-8899, 8900-8907, 8923, 8947, 8948, 8982, 8983, 8987-8989, 8993, E. carotovora subsp. carotovora 8982, E. rhapontici LMG 2655, 2688, 2694, 2708, 2710, Pseudomonas syringae pv. phaseolicola 4012, 4270, P. syringae pv. atrofaciens 8281, B. cinerea 1-6 (з Інституту мікробіологіі та вірусології НАН України, ім. Д. К. Заболотного, Київ), P. syringae pv. phaseolicola SP10, P. syringae pv. phaseolicola HB 10Y, P. syringae pv. phaseolicola 2489, P. syringae pv. phaseolicola 2509 (з Наукового інституту охорони здоров'я, Нью Йорк, США, від проф. L. Mindich), В. mycoides 573, B. subtilis 6633 (з Державного інституту стандартизації та контролю медичних біологічних препаратів ім. Л. А.Тарасевича, м. Москва, Росія), B. subtilis 304, 41 (від д-ра А. Я. Куканової, НДІ "Генетика", м. Москва, Росія), B. cinerea SH7 (від н. с. Л. А. Швецової з Інституту цукрової промисловості, Київ), Grifola frondosa DSM 8529 тa DSM 8635; B. cinerea МJW 94, B. fabae МJW 94 (від проф. J. W. Mansfield, London University, UK), E. amylovora NCPPB 2024, NCPPB 8705, E. rhapontici NCPPB 139; E. amylovora Еа 311, Ea 394, 610, 651, 659, 661, 684, 691 (з Інституту помології та флорокультури, Скієрнієвіце, Польща), CFBP 1367, CFBP 1430, CFBP 2045, CFBP 2312, CFBP 2582, CFBP 2585; E. carotovora subsp. atroseptica 32 Rif та E. rhapontici 290-3, 418-3, 444 3bk, 445-3, 535-1b (з Білоруського держуніверситету, Мінськ), Мonilia laxa C97 (від др. І. Клоутворової, Дослідницька станція в Оломовцях, Чехія).
Культури грибів зберігались на сусло-агарі, Erwinia - на 1% картопляному агарі, інші бактерії та бацили - на 1% агарі Oxoid при 4°С.
Конідії Botrytis змивались з міцелію, щo ріс на КДА, відмивались 2 хв двічі у CДВ центрифугуванням, 1000 g. Їх концентрацію підраховано в гемоцитометрі і на пластинах агару після формування колоній з інокульованих розведень суспензій. Біомасу газонів бактерій, вирощену на агаризованих середовищах утилізовано для приготування суспензій у СДВ та СВВ. Всього використано 783 штами бактерій та 21 штам грибів.
2.2. Ідентифікація мікроорганізмів. Морфологічні, фiзіолого-біохімічні властивості ізолятів бацил
Бактерії із гнилих тканин рослин виділялено на середовищі, що дає змогу від-ділити роди Erwinia та Aerobacter від інших бактерій [442]. Ізоляти, мацеруючі зрізи бульб картоплi віднесено до роду Erwinia. E. carotovora subsp. atroseptica, E. carotovora subsp. carotovora диференційовано за методом [443], a E. chryzanthemi - за формою колоній на глюкозо-картопляному агарі (рН 6,5).
З ґрунту м'якогнильні бактерії виділено за методом Leach [444]. У зроб-лені коркорізом у бульбах oтвopи вносилось близько 200 мг ґрунту. При загниванні, гнильною масою послідовно інокулювано свіжі бульби, а далі селективне середови-ще [443]. Мікроби, що викликали гниль бульб, засівались на глюкозокартопляний агар, Грамнегативні ізоляти - на середовище Кіng B [445] для флуоресціюючих Pseudomonas. Оксидазонегативні культури [446], що закислювали глюкозний бульон в анаеробних умовах, віднесено до ервіній. Для селективного пригніченнямікробів використано СМ, ГЛ, варіацію температур.
По 5 г зразків (ґрунт, компост як добриво, зелені частини рослин, квітки груш) відмивались у 50 мл СДВ у 200-мл колбах Ерленмеєра по 30 хв при 150 коливань/хв. По 5 мл з змивів прогрівали 30 хв при 70°С, щоб убити неспорову ф
- Київ+380960830922