РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Настоящая работа основана на результатах клинического, биохимического и
иммунологического исследования 168 больных хронической микробной экземой.
Клиническая часть работы выполнена на базе стационара Республиканского
кожно-венерологического диспансера (г. Симферополь, главный врач – Г.П.Чинов).
Исследования проводились в лабораториях кафедр Крымского государственного
медицинского университета им. С.И. Георгиевского (ректор – профессор
А.А.Бабанин).
Клиническая характеристика особенностей течения болезни проводилась с учетом
как основного, так и сопутствующих диагнозов. Диагноз выставлялся после
тщательного изучения и анализа жалоб, анамнеза жизни и заболевания, клинических
проявлений дерматоза, результатов общесоматических исследований.
При сборе анамнеза нас интересовали причины и длительность заболевания, частота
рецидивов. Кроме этого, выясняли применявшееся в прошлом лечение, его
эффективность, время пребывания на больничном листе, продолжительность
ремиссий. Особое внимание уделялось опросу аллергологического анамнеза,
выявлению сопутствующей патологии со стороны внутренних органов и систем.
Приступая к осмотру больных, определяли их общее состояние, тип телосложения,
характер питания, оценивали состояние здоровой неизмененной кожи и видимых
слизистых оболочек. В клинической характеристике дерматоза учитывали
распространенность процесса, выраженность морфологических элементов сыпи. Для
оценки состояния пациентов использовались общеклинические методы исследования:
общий анализ крови и мочи, анализ крови на сахар, исследование кала на яйца
гельминтов, биохимический анализ крови. По показаниям, с целью уточнения
морфофункционального состояния внутренних органов, назначалось обследование и
консультация у специалистов: терапевта, гастроэнтеролога, сосудистого хирурга,
эндокринолога, иммунолога, невропатолога, гинеколога, оториноляринголога.
Наряду с общепринятыми клиническими лабораторными методами нами осуществлены
специальные биохимические и иммунологические исследования. У больных (168
человек) брали кровь натощак из локтевой вены и утреннюю порцию мочи дважды:
накануне начала терапии и после ее завершения. Практически здоровые (30
человек) сдавали кровь и мочу однократно.
Методической особенностью работы явилось одновременное изучение
иммунологических и биохимических показателей и влияние на них комплексного
лечения с применением Реосорбилакта и Эрбисола у больных хронической микробной
экземой.
2.1. Количественное определение среднемолекулярных пептидов в сыворотке крови и
моче
Уровень среднемолекулярных пептидов в сыворотке крови определяли по методике
Н..Габриэлян и соавт. [47]. К 1 мл свежевыделенной сыворотки добавляли 0,5 мл
10% трихлоруксусной кислоты, перемешивая до однородной массы и центрифугировали
30 мин при 3000 об/мин. К 0,5 мл надосадочной жидкости добавляли 4,5 мл
дистиллированной воды и спектрофотометрировали на СФ-46 против дистиллированной
воды при 245нм и 280 нм. Количественное содержание МСМ выражали в условных
единицах оптической плотности.
Уровень МСМ в моче определяли следующим образом [132]: 2 мл мочи и 1 мл 15%
трихлоруксусной кислоты перемешивали и производили осаждение.
Через 15 мин центрифугировали при 3000 об/мин в течении 30 минут. Супернатант
разводили дистиллированной водой в соотношении 1:9 и фотометрировали против
контроля (контроль – дистиллированная вода). Пробу спектрофотометрировали на
СФ-46 в диапазоне длин волн 238-300 нм.
Конечный результат выражается по интегральной площади:
(Еl238 + Еl242 + Еl246 + …+ Еl300) х 4 = (2.1)
степень интоксикации, т.е. сумма экстинций, умноженная на шаг длины волны.
Количественное содержание МСМ выражали в условных единицах оптической
плотности.
Исследования уровней МСМ были проведены совместно с кандидатом биологических
наук Казаковой В.В.
2.2 Определение продуктов перекисного окисления липидов и антиоксидантов
Компоненты системы свободнорадикального окисления липидов и антиоксидантов
определяли комплексом методов, позволяющих оценить основные звенья этого
процесса.
Первичные продукты ПОЛ исследовали путем экстракции смесью гептан-изопропанол
[49]. Для экстракции брали 0,4 мл сыворотки. После энергичного встряхивания
смесь расслаивали добавлением 0,02 н НСl и в гептановом слое измеряли
оптическую плотность. При длине 232 нм определяли уровень диеновых коньюгатов
(Д.кон.), а при 273 нм уровень диенкетонов (Д.кет.). Результаты выражали в
единицах оптической плотности (Е) на 1 мл.
Уровень ТБК – активных продуктов (ТБКАП) оценивали по цветной реакции с
2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК) в присутствии ионов Fе(3+) [203]. В пробирку с
0,05 мл сыворотки крови добавляли 0,2 мл 0.27% раствора FeCl3 и через 10 минут
доводили до 1,8 мл 0,2 М глициновым буфером (рН – 3,6). После добавления 1,55
мл 0,8% раствора ТБК смесь кипятили на водяной бане 15 минут, охлаждали,
добаляли 1 мл 20% ТХУ, 2 мл хлороформа, тщательно встряхивали и
центрифугировали 15 минут при 3000 об/мин. Верхний слой колориметрировали при
532 нм и выражали результаты в Нмоль/мл.
Церулоплазмин определяли модифицированным методом Ревина, основанном на
окислении р-фенилендиамина при участии церулоплазмина с остановкой реакции
раствором фтористого натрия и измерением оптической плотности при 540 нм.
Результаты выражали в мг на литр биологического материала [105].
Супероксиддисмутазу определяли в модельной системе образования супероксидных
анионов при взаимодействии НАДН и феназинметасульфата (ФМС). Способность СОД
конкурировать за супероксидные а
- Київ+380960830922