РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
2.1. Загальне згрупування дослідів
Експерименти виконані на 129 нелінійних статевозрілих білих щурах-самцях масою 200 - 250 г та 48 білих мишах масою 35 - 45 г. Проведено 147 дослідів in vitro з гомогенатами печінки щурів.
Тварин утримували в стандартних пластмасових клітках (по 4-5 тварин) в умовах "відкритої системи", природного освітлення, при температурі 18 - 210С і відносній вологості повітря 45-60%. Вони одержували раціон типу кормової суміші і охолоджену прокип'ячену воду за потребою з автоматичних поїлок.
Для моделювання стресорного ушкодження печінки у щурів був обраний гострий іммобілізаційний стрес за Сел'є, який відтворювали шляхом жорсткої іммобілізації щурів на спині протягом трьох годин [50]. Ця модель стресу апробована і дозволяє в експериментальних умовах відтворити порушення різних ланок метаболізму в ефекторних органах і, зокрема, в печінці [128].
Гострий стрес у мишей відтворювали шляхом підвішування тварин за шкірну складку шиї за допомогою атравматичних затискачів протягом 60 хв [55].
Досліди були виконані навесні в один і той же час доби. Евтаназію щурів здійснювали під тіопенталовим наркозом (50 мг/кг маси тіла, внурішньоочеревинно) через 1,5 год після завершення стресорного впливу шляхом забору крові з серця до його зупинки. Евтаназію мишей проводили під ефірним наркозом шляхом декапітації через 1 год після завершення дії стресорного фактора.
Кожній серії дослідів відповідала група інтактних тварин. Контролем слугували стресовані тварини, яким вводили 0,9% розчин натрію хлориду, (щурам - в об'ємі 0,5 мл, мишам - 0,1 мл).
Всі експериментальні дослідження на тваринах проводились під наглядом комісії по біоетиці Української медичної стоматологічної академії. Для розширення уявлення про механізми дії застосованих препаратів і з метою зменшення кількості дослідних тварин були використані біологічні системи in vitro на основі гомогенатів печінки інтактних щурів [20].
Загальне згрупування дослідів на тваринах наведено в табл. 2.1.
Таблиця 2.1
Загальне згрупування дослідів на тваринах
серіїТвариниХарактер впливуПрофілактикавидкіль-кістьпрепаратдозашлях і режим введення12345671.
Білі щури
10
10
10
10
Інтактні
Cтрес
Стрес
Інтактні
Стрес
Інтактні
Стрес
0,9% розчин NaCl
Пірацетам
Пірацетам
Церебролізин
Церебролізин
Мексидол
0,5 мл
100 мг/кг
100 мг/кг
0,1 мл/кг
0,1
мл/кг
100 мг/кг-
Внутрішньоочеревин-но одноразово за 30 хв до початку стресу
- // -
- // -
- // -
- // -
- // -
продовження табл. 2.11234567Білі щури7Інтактні
Мексидол100 мг/кгВнутрішньоочеревин-но одноразово за 30 хв до початку стресу 2.Білі щури6
Інтактні
Інтактні
Стрес
Ст Cтрес
Інтактні-
0,9% розчин NaCl
0,9% розчин NaCl
Пірацетам
Пірацетам
0,5 мл
0,5 мл
300 мг/кг
300 мг/кг -
Внутрішньоочеревин-но одноразово за 30 хв до початку стресу
- // -
- // -
- // -3Білі миші8
8Інтактні
Стрес
Стрес
Стрес
Стрес
Стрес-
0,9% розчин NaCl
Мексидол
Емоксипін
Піридоксину гідрохлорид
Натрію сукцинат-
0,1 мл
100 мг/кг
100 мг/кг
100 мг/кг
50 мг/кг-
Внутрішньоочеревин-но одноразово за 30 хв до початку стресу
- // -
- // -
- // -
Одноразово з їжею за 12 годин до стресу
2.2. Фармакологічна корекція стрес-реакції
Для попередження стресорних ушкоджень печінки використовували такі препарати.
1. Пірацетам (2-окси-1-піролідинілацетамід) - комерційний препарат виробництва фармацевтичної фірми "Дарниця" (м. Київ, Україна). Препарат вводили тваринам у дозі 100 і 300 мг/кг маси тіла внутрішньоочеревинно за 30 хв до початку гострого іммобілізаційного стресу за Сел'є. Аналогічно вводили препарат інтактним тваринам.
2. Церебролізин - водний розчин гідролізату мозкової речовини (активна фракція містить 18 амінокислот і пептиди, молекулярна маса яких не перевищує 1000 дальтон) у вигляді комерційного препарату фірми "EBEWЕ" (Австрія). Його вводили щурам у дозі 0,1 мл/кг маси тіла внутрішньоочеревинно за 30 хв до початку гострого іммобілізаційного стресу. Таким же чином ін'єкціювали церебролізин інтактним тваринам.
3. Мексидол (2-етил-6-метил-3-оксипіридину сукцинат) - препарат з групи антиоксидантів, який має психотропні властивості [134]. Мексидол застосовували у вигляді комерційного препарату виробництва Експериментального заводу кардіологічного науково-виробничого комплексу МОЗ РФ і ООО "Наука-Центр Фарма" та субстанцію мексидолу, люб'язно надану проф. Л.Д. Смирновим (Національний дослідницький центр біологічно активних речовин, Стара Купавна, Росія). Останню розчиняли в стерильному 0,9% розчині натрію хлориду. Мексидол вводили тваринам у дозі 100 мг/кг маси тіла внутрішньоочеревинно за 30 хв до початку дії стресорного фактору. Аналогічно препарат отримували інтактні тварини.
З метою з'ясування ролі складових молекули мексидолу стосовно впливу на тканину печінки було досліджено ефекти аналогів його структурних компонентів - емоксипіну, піридоксину гідрохлориду і натрію сукцинату на моделі гострого стресу у мишей.
4. Емоксипін (2-етил-6-метил-3-оксипіридин гідрохлорид) - 1% водний розчин в ампулах виробництва Таллінського хіміко-фармацевтичного заводу (м. Таллінн, Естонія). Препарат вводили тваринам у дозі 100 мг/кг маси тіла внутрішньоочеревинно за 30 хв до початку стресу.
5. Піридоксину гідрохлорид (2-метил-3-окси-4,5-диоксиметилпіридину гідрохлорид) - 5% розчин в ампулах (виробник - підприємст