ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Экспериментальные исследования выполнены на 642 животных, в том числе на 30 белых нелинейных мышах массой 18,0-20,0 г, 582 белых нелинейных крысах массой 180- 200 г, 20 морских свинках массой 600-660 г, 10 кроликах породы Шиншилла массой 2,5-3,0 кг, выращенных в питомнике вивария ЦНИЛ НФаУ, которые находились на стандартном пищевом и водном рационе в соответствии с санитарно-гигиеническими нормами [44, 50]. Все болевые манипуляции были проведены под барбамиловым наркозом.
Предметом фармакологических исследований была комбинированная мазь с условным названием "Димексером", разработанная на кафедре заводской технологии НФаУ.
Состав мази:
ксероформ - 5,0 г
димексид - 5,0 г
ПЭО-400 и ПЭО-1500 - до 100,0 г в соотношении 8,5:1,5.
Распределение животных по сериям экспериментов согласно задачам исследования приведено в табл.2.
Острую токсичность "Димексерома" изучали по методике Штабского [55, 143, 145] на 2-х видах животных (белых нелинейных мышах и белых нелинейных крысах обоего пола) при двух путях введения (эпикутантном и внутрижелудочном). Для внутрижелудочного введения использовали 50% водную суспензию мази "Димексером". Наблюдение за животными вели на протяжении 2-х недель [44].
Таблица 2
Группировка экспериментальных исследований на животных
№ п/пСерии экспериментовВид животныхКоличество животных12341.Определение острой токсичности мази "Димексером"белые нелинейные крысы обоего пола;
белые нелинейные мыши обоего пола30
30
2.Определение эффективной дозы мази "Димексером"белые нелинейные крысы обоего пола403.Изучение влияния концентрации димексида в составе мази на эпителизацию ожоговых ранбелые нелинейные крысы обоего пола324.Изучение антиэкссудативного действия мази "Димексером"белые нелинейные крысы обоего пола505.Определение репаративной активности мази "Димексером" на моделях асептических и инфицированных линейных резаных ранбелые нелинейные крысы обоего пола2006.Определение ранозаживляющего действия мази "Димексером" на модели плоскостной раны кожибелые нелинейные крысы обоего пола30
Продолжение табл. 2
12347.Изучение эффективности мази "Димексером" на модели термического ожога кожибелые нелинейные крысы обоего пола408.Изучение эффективности мази "Димексером" при контактном дерматитебелые нелинейные крысы обоего пола409Влияние мази "Димексером" на синтез нуклеиновых кислотбелые нелинейные крысы обоего пола4010.Влияние мази "Димексером" на активность ферментов кожибелые нелинейные крысы обоего пола4011.Влияние мази "Димексером" на показатели рН и окислительно-восстанови-тельного потенциала кожибелые нелинейные крысы обоего пола2012.Влияние мази на органы и системы в хроническом экспериментебелые нелинейные крысы обоего пола;
кролики породы Шиншилла обоего пола20
10
13.Изучение аллергизирующего и местнораздражающего действия мази "Димексером"морские свинки обоего пола20Всего использовано животных - 642
Эффективную дозу мази "Димексером" и ее доверительные границы были рассчитаны по методу, основанному на линейной зависимости эффекта от испытанных доз [55]. При расчете эффективной дозы использовали уравнение прямой с угловым коэффициентом а.
У=aХ+в, (1)
где в - свободный член.
Значения a и в находили из нормальной системы Гаусса (Б.М. Штабский и соавт.):
(2)
(3)
где:
Х1 и Х2 - значения двух крайних испытанных доз, вызывающих эффект у менее и более 50% животных, третья доза является промежуточной;
У1 и У2 - соответствующие дозам Х1 и Х2 проценты эффекта;
п - количество доз, используемых при расчете, равное 3.
При решении уравнения (1) относительно Х, подставляли в формулу (4) значения У, равные 50%, 84% и 16% эффекта, соответствующих ЕД50, ЕД84 и ЕД16.
(4)
Для определения доверительных границ рассчитывали ?, т,mt
2?=ЕД84-ЕД16 (5)
т- средняя ошибка среднеэффективной дозы по Миллеру-Тейнеру и равна:
(6)
где: N - общее число животных в группах;
t- критерий Стьюдента.
Доверительные границы ЕД50 находили при р=0,05 для степеней свободы f = N-1.
Антимикробную активность мази "Димексером" исследовали методом диффузии в агар (метод "колодцев") [101, 114, 126]. Для этой цели использовали штаммы S. aureus АТСС 25923, E. coli АТСС 25922, B. subtillis АТСС 6633, Ps. aeruginosa АТСС 27853, C. albicans АТСС 184. Антимикробную активность в отношении исследуемой микрофлоры оценивали по наиболее выраженной зоне задержки роста, вызываемой испытуемым препаратом в сравнении с контролем.
Антиэкссудативную ативность мази "Димексером" изучали на модели острого воспалительного отека, вызванного субплантарным введением в заднюю лапу крысы 0,1 мл 1% водного раствора каррагенина [44, 143, 160, 178]. Опыты проводили на 50 белых нелинейных крысах массой 200-205 г обоего пола. Животные были распределены на 5 групп (по 10 крыс в каждой). За час до введения каррагенина на стопы животных 1-й группы наносили мазь "Димексером", 2-й группы - 10% индометациновую мазь, 3-й группы - 10% ксероформную мазь на вазелиновой основе, 4-й группы - линимент бальзамический по Вишневскому. Животные 5 группы служили нелеченным контролем. Величину отека измеряли при помощи онкометра. Онкометрию лапы проводили в начале опыта и на пике развития отека - через 4 часа. Активность препарата выражали в % угнетения отека, ср