ГЛАВА 2
МЕТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Объем исследований
Исследования проводились в течении трех лет (2002 - 2004 гг.) на базе городской детской клинической больницы г. Сум.
Для решения поставленных задач было проведено клинико-лабораторное и инструментальное обследование 183 детей в возрасте от 29 дней до 3 лет. Из них 136 детей проходили курс стационарного лечения в городской детской клинической больнице г. Сум по поводу внебольничной пневмонии и 47 здоровых детей того же возраста, которые находились под наблюдением в городских детских поликлиниках №1 и №2. Кроме этого проведено патоморфологическое исследование 37 больных, умерших от пневмонии и анализ их медицинской документации и протоколов аутопсий, произведенных в Сумском областном патологоанатомическом бюро в течении 5 лет (1999 - 2003 г.г).
Для определения факторов, которые могли оказать влияние на исход заболевания, в ходе нашего исследования сопоставлялись результаты обследования и анализа медицинской документации двух групп детей: 136 детей раннего возраста, выздоровевших после пневмонии (благоприятный исход) и 37 детей умерших от пневмонии (неблагоприятный исход).
С целью изучения клинической эффективности и переносимости препарата фенспирид при пневмонии больные были разделены на две группы: группу сравнения составили 46 детей с пневмонией, которые получали традиционную терапию и в основную группу были включены 32 больных ребенка, которые кроме традиционной терапии получали фенспирид. Применение отхаркивающих средств, противокашлевых, бронхолитических (эуфиллина), десенсибилизирующих препаратов и глюкокортикоидов у детей этой группы исключалось.
2.2 Методы исследования
Для верификации диагноза пневмонии, кроме клинических данных, обязательно использовалось рентгенологическое исследование легких. У детей раннего возраста (от 29 дней до 3 лет) диагноз выставлялся согласно клинической классификации заболеваний органов дыхания, принятой на II съезде фтизиатров и пульмонологов Украины 20 - 23 октября 1998 года с учетом поправок, внесенных Пленумом Ассоциации педиатров Украины (1998).
Лабораторное исследование включало клинический анализ периферической крови, биохимический анализ крови, общий анализ мочи, исследование кала на яйца глист, бактериологическое исследование кала.
Для расшифровки этиологии заболевания использовали иммунофлюоресцентный и бактериологический методы исследований слизи из зева и носа. Определение антигенов респираторных вирусов в смывах из носоглотки проводили методом иммунофлюоресценции [108]. В качестве диагностикумов использовали флюоресцирующие иммунные глобулины, содержащие антитела к различным респираторным вирусам, производства Московского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалея (Россия). Выделенные бактериальные культуры идентифицировались, а затем тестировались на чувствительность к антибиотикам методом дисков.
Патоморфологические исследования включали анализ протоколов вскрытий и такие клинические показатели как возраст и пол детей, масса ребенка при рождении, состояние здоровья детей до заболевания пневмонией, продолжительность болезни до госпитализации, а также течение беременности и родов у матери, состояние ее здоровья.
Изучение иммунологического статуса детей проводили путем определения уровней Т- и В- лимфоцитов, концентрации в крови IgA, IgM, IgG; уровня ЦИК, фагоцитарной функции нейтрофилов (ПФ и ФЧ), а также уровней кортизола, провоспалительного ИЛ-1 и противовоспалительного ИЛ-10.
Определение иммунологических показателей у больных острой пневмонией проводилось дважды: в острый период заболевания (1-3 день от начала болезни) и в период стабильного улучшения (12-14 день). Сравнение иммунологических показателей у больных в периоде клинического благополучия и у здоровых детей осуществляли с целью выявления степени нормализации иммунного гомеостаза.
Иммунологические исследования проводили в иммунологической лаборатории ОДКБ г. Сум. Набор тестов для иммунологического исследования включал в себя определение следующих показателей: абсолютное содержание лимфоцитов в крови (109/л ), относительное (%) и абсолютное (109/л) количество Т-лимфоцитов по тесту спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК), относительное (%) и абсолютное (109/л) количество В-лимфоцитов по тесту розеткообразования с эритроцитами мыши (М-РОК) [202]. Для определения абсолютного содержания лимфоцитов и их субпопуляций использовали параметры общего клинического анализа крови - общее количество лейкоцитов (109/л) и относительное количество лимфоцитов (%) в периферической крови [202].
О функциональной активности В-лимфоцитов судили по концентрации стандартных сывороточных иммуноглобулинов классов A, M, G в сыворотке крови, определение которых проводили методом радиальной иммунодиффузии в геле по G. Mancini et al. (1965) [293].
Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли с помощью светового микроскопа по способности нейтрофилов поглощать латекс-частички. Для оценки фагоцитарной активности нейтрофилов изучали содержание фагоцитирующих клеток (нейтрофилов) и фагоцитарное число, то есть число латекс-частичек, которые в среднем поглощаются одной клеткой [202]. Поглотительная способность клеток оценивалась по двум показателям:
1. Процент фагоцитоза (ПФ) - процент клеток, вступивших в фагоцитоз от общего их количества. В норме ПФ у детей 30-65%.
2. Фагоцитарное число (ФЧ) - частное от общего количества поглощенных латекс-частичек на ПФ. В норме после 30 - минутной инкубации ФЧ=2-8.
Концентрацию ЦИК определяли методом преципитации 3,5% раствором полиэтиленгликоля с последующим фотометрическим определением оптической плотности. Учет реакции производился на фотоколориметре КФК- 2. Уровни ЦИК выражали в единицах оптической плотности. В норме уровень ЦИК составляет 0,04-0,09 ед. опт. пл. [189].
Показатели ЛИИ определяли по методике Я.Я.Кальф-Калифа (1941) [75].
Деятельность
- Київ+380960830922