РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Настоящая работа основана на результатах клинического, бактериологического и
иммунологического обследования 145 больных псориазом. Клиническая часть работы
выполнена на базе стационара Крымского республиканского клинического
кожновенерологического диспансера (г. Симферополь). Лабораторные исследования
проводились в ЦНИЛ Крымского государственного медицинского университета им.С.И.
Георгиевского и бактериологической лаборатории Республиканской клинической
больницы им. Н.А.Семашко.
Клиническая характеристика особенностей течения болезни проводилась с учетом
как основного, так и сопутствующих диагнозов. Диагноз выставлялся после
тщательного изучения и анализа жалоб, анамнеза жизни и заболевания, клинических
проявленний дерматоза, результатов общесоматических исследований.
При сборе анамнеза нас интересовали причины и длительность заболевания, частота
рецидивов. Кроме этого, выясняли применявшееся в прошлом лечение, его
эффективность, время пребывания на больничном листе, продолжительность
ремиссий. Особое внимание уделялось опросу аллергологического анамнеза,
выявлению сопутствующей патологии со стороны внутренних органов и систем.
Приступая к осмотру больных, определяли их общее состояние, тип телосложения,
характер питания, оценивали состояние здоровой неизмененной кожи и видимых
слизистых оболочек. В клинической характеристике дерматоза учитывали
распространенность процесса, выраженность морфологических элементов сыпи. Для
оценки состояния пациентов использовались общеклинические методы исследования:
общий анализ крови и мочи, анализ крови на сахар, исследование кала на яйца
гельминтов, биохимический анализ крови. По показаниям, с целью уточнения
морфофункционального состояния внутренних органов, назначалось обследование и
консультация смежных специалистов: терапевта, гастроэнтеролога, сосудистого
хирурга, эндокринолога, иммунолога, невропатолога, гинеколога,
оториноляринголога.
Наряду с общепринятыми клиническими лабораторными методами нами были
осуществлены специальные бактериологические и иммунологические исследования. У
больных псориазом (145 человек) брали кровь натощак из локтевой вены и утреннюю
порцию фекалий дважды: накануне начала терапии и после завершения. Практически
здоровые лица (35 человек) сдавали кровь и фекалии однократно.
Для оценки тяжести течения заболевания и эффективности проводимой терапии
использовали индекс тяжести и распространенности псориаза PASI. Этот показатель
позволяет оценить распространенность патологического процесса, выделить те или
другие преобладающие симптомы, а также степень уменьшения патологических
проявлений в процессе лечения.
Для вычисления индекса рассматривались четыре области тела: голова (г),
туловище (т), верхние (в) и нижние (н) конечности. Эти области соответственно
составляли 10 %, 30 %, 20 % и 40 % от всей поверхности тела. Распространенность
патологических высыпаний выражалась в числовых величинах: от 0 (нет поражения)
до 6 баллов – 90–100 % пораженной поверхности (1 балл < 10 %, 2 балла < 30 %, 3
балла < 50 %, 4 балла < 70 %, 5 баллов < 90 %).
Для оценки тяжести течения псориаза выделены такие признаки: интенсивность
окрашивания высыпаний – условно эритема (э), инфильтрация (и) и шелушение (ш),
которые оценивались в баллах от 0 (отсутствие признака) до 4 (очень тяжелая
степень выраженности признака): 1 балл – легкая, 2 балла – средняя и 3 балла –
тяжелая степень выраженности.
Для вычисления PASI сумма степеней тяжести, которая рассчитывается для трех
основных симптомов, умножалась на числовое значение пораженных областей и
процентное выражение четырех областей тела. Потом полученные величины
суммировались, что и определяло величину PASI:
PASI = 0,1 (э + и + ш) Аг + 0,3 (э + и + ш) Ат + 0,2 (э + и + ш) Ав +
+ 0,4 (э + и + ш) Ан (2.1)
2.1. Методы исследования гуморального иммунитета
2.1.1. Определение иммуноглобулинов классов А, М, G
Определение основных классов Ig в сыворотке крови проводили разработанным ЦНИЛ
клинической иммунологии КГМУ микротурбидиметрическим методом [34].
Микротурбидиметрический метод определения IgG, IgM, IgA человека является
простым, чувствительным и воспроизводимым, не требующим наличия специального
оборудования и сводящий к минимуму расход дорогостоящих реагентов; он надежен,
легко воспроизводим, имеет высокую чувствительность и полностью позволяет
получать результаты анализа через 1,5 – 2 часа после получения образцов. В
работе использовали моноспецифические сыворотки к IgG, IgM, IgA человека,
полученные в НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи (Москва,
Россия), и стандартную сыворотку крови человека (CI K95) из набора для
определения иммуноглобулинов методом РИД (НИИ эпидемиологии и микробиологии, г.
Нижний Новгород, Россия).
2.1.2. Определение аутоантител классов М и G к одно и двунитевой ДНК
Для определения аутоантител классов M и G к высокополимерной нативной ДНК (анти
– dsДНК – IgM и анти – dsДНК – IgG) в лунки полистироловых планшетов ( ВНИИ
«Медполимер», Россия) вносили по 100 мкл раствора высокополимерной нативной ДНК
из эритроцитов цыплят (10 мкг/мл;, «Reahal»,Венгрия) в 0,05 М карбонатном
буфере, pH9,6 и инкубировали в течение ночи (12 – 18 часов) при + 4…10?С. После
отмывки лунок (4 раза по 1 мин) 0,033 М фосфатным буфером, pH 7,4 содержащим
1%- й NaCI и 0,05% -й Tweeh – 20 (РBS – T) в них последовательно вносили по 100
мкл разведенной (1:100) тестируемой сыворотки крови и разведенного (1:4000)
иммунопероксидазного коньюгата козьих аффинно очищенных антител против IgM и
IgG человека («Sigma», США). Для разведения сыв
- Київ+380960830922